分光光度法50管/24样

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-CL主要来源于土壤微生物，S-CL催化农作物秸秆产生的葡萄糖是主要的碳源营养物质。

测定原理：

采用蒽酮比色法测定S-CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、甲苯、硫酸（不允许快递）

和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体40mL×1瓶，4℃保存；

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL蒸馏水和45mL 浓硫酸充分溶解待用。

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

加样表和测定步骤：

对照管测定管

风干土样（g）0.10.1

试剂一(μL)100100

振荡混匀15min

试剂二（μL）180

试剂三（μL）740740

蒸馏水（μL）360180

37℃振荡反应3h后，90℃水浴15min（盖紧，防止水分散失）,冷却后

8000g25℃离心10min，取上清，得糖化液

糖化液(μL)350350

试剂四(μL)650650

混匀，90℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，620nm处蒸馏水调零，测定吸光值

A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

S-CL活力计算：

标准条件下测定的回归方程为y=5.018x-0.0462；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1mg葡萄糖定义为一个酶活力单位。

S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462)÷5.018×V反总÷W÷T=19.1×(ΔA+0.0462)

T：反应时间，3h=1/8d；V反总：反应体系总体积：1.2mL；W：样本质量，0.1g。