提供者：青岛捷世康生物科技有限公司 发布时间：2022/3/7 10:41:36 阅读次数：195次 进入该公司店铺
测定意义
木质素是构成植物细胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇构成的一类物质，存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间，起抗压作
用。
测定原理
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在 280nm 处有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低与木质素含量正相关。
需自备的仪器和用品
天平、40 目筛，玻璃试管、烧杯、离心机，恒温水浴锅、烘箱、封口膜、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、高氯酸。
试剂组成和配制
试剂一：液体 50mL×2瓶，4℃保存。
试剂二：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体 100mL×2瓶，4℃保存。
样品处理
样品 80℃烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛，称取约 5mg（记为 W）于 10mL 玻璃试管中（务必用玻璃试管，不可用 Ep 管）
测定操作表
空白管 | 测定管 | |
样本（mg） | 5 | |
试剂一（μL） | 1000 | 1000 |
高氯酸（μL） | 40 | 40 |
于 10mL 玻璃试管中，用封口膜密封，充分混匀，80℃水浴 40min，每隔 10min 震 荡一次，然后自然冷却 | ||
试剂二（μL） | 1000 | 1000 |
充分混匀 | ||
上清（μL） | 40 | 40 |
试剂三（μL） | 1960（参照注意事项四） | 1960（参照注意事项四） |
取200ul于微量石英比色皿或者96孔板，测定 280nm处吸光值 A。分别记为 A 空白管和 A 测定管，ΔA=A 测定管-A 空白管 计算公式 用微量石英比色皿计算公式如下： 标准曲线：y = 0.02776x+0.0068，R2=0.9889 Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0068)÷0.02776×V 反总×10 -3÷W×T =0.0735×(ΔA-0.0068) ÷W×T V 反总：反应总体积：2.04mL；W：样本质量，g；T：稀释倍数 用96孔板计算公式如下：标准曲线：y = 0.01388x+0.0034，R2=0.9889 Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0034)÷0.01388×V 反总×10 -3÷W×T =0.1470×(ΔA-0.0034) ÷W×T V 反总：反应总体积：2.04mL；W：样本质量，g；T：稀释倍数 注意事项 1. 试剂一有毒性，请操作时做好防护措施，加热必须用封口膜密封，以防气体溢出。 2. 加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。 3. 试剂三具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱子操作。 4.取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度，试剂三的用量可调整，吸光值在0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。 5.乙酰化测定木质素含量如受到实验环境的影响，可自行制作标准曲线。 | ||
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