elisa试剂盒在科研领域一直以灵敏度高和特异性强的特点稳扎脚跟,说起检测试剂,那没有比elisa试剂盒的操作步骤和技巧来的更清晰。在以往的文章中,劲马小编不止一次为您解析过试剂盒的操作步骤及技巧,不知您是否还有印象?如果不记的话没有关系,今天就为您再次做一次总结,请看好啦!
操作步骤
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
操作技巧
1.切记在加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
2.在吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
3.样品稀释液应用加液器加注,并经常校对其准确性。
4.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
5.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗人IgG工作液。
6.ELISA试剂盒实验中,加样后及时放人孵箱,标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
7.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
8.没有去离子水或双蒸水时,可以使用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿使用自来水。
9.在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。
10.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差。
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