晨时解读:ELISA技术培训之检测样品的处理技巧_技术交流_仪器仪表技术文献

晨时解读:ELISA技术培训之检测样品的处理技巧

提供者：上海恒远生物技术发展有限公司发布时间：2018/10/24 10:22:03 阅读次数：3916次进入该公司店铺

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ELISA实验的效果可不能完全依赖试剂盒产品，在我公司保证产品质量的同时，您还需要注意保存、样本、操作等等。今天上海恒远带您来看ELISA技术培训之检测样品的处理技巧！供参考。

一、细胞裂解液
① 吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
② 收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。
③ 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
④ 将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。
⑤ 4℃10000×g 离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

二、血清
这是最常用于ELISA检测的一类样本，处理也比较简单。
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜，使血清析出。(最好将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面增大，能使血清更大程度的析出)4℃1000×g离心20分钟，仔细收集上清。建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染，因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。

三、血浆
用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本，标本采集后30min内4℃1000×g离心15min，取上清即血浆。将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等，检测时还应仔细阅读试剂盒说明书，检查试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。

四、细胞培养上清
取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

五、组织匀浆液
① 将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。
② 将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分
③ 将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)
④ 吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。

六、尿液、唾液等其他液体生物样本
1000×g离心20min，取上清即可检测。
总的来说，因为ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，所以应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。
为了保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本最好在1~6个月内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。

最后，上海恒远提醒您，还要保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。