提供者:上海劲马实验设备有限公司 发布时间:2018/3/20 9:03:23 阅读次数:1191次 进入该公司店铺
很多时候,科研者们千辛万苦地染出了一张张漂亮的免疫组化片子,但是却不知道如何正确地分析,得出理想的结果。这实在是一件憾事。
其实,免疫组化结果分析的protocol教科书和实验手册上面都有。不再重复了。今天上海劲马小编将根据以往的文章及经验谈谈免疫组化结果分析之独门绝招,都是干货,希望您会喜欢!
1、对照染色:
和做实验的时候必须设立对照组一样,免疫组化也必须设立对照染色。没有对照染色的免疫组化结果是不可信的。对照一般有阳性组织对照,阴性组织对照,阴性试剂对照,自身对照。一般来说,有一个阳性组织对照和一个阴性组织对照就足够了。
2、定位:
抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内;PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内等等。不在抗原所在部位的阳性着色,不能视为确切的阳性结果。有可能是非特异性染色或者假阳性。不能确定怎么办?这就要用到上一段提到的对照染色了。
3、半定位:
现在一般用图像分析系统进行定量。如果您的实验室不幸没有那么高大上的话,就只好赶鸭子上架,用肉眼定一下量了。因为人为主观性比较强,所以只能称作半定量。免疫组化的半定量一般就分为三级:弱(+),中(++),强(+++)。以绿色免疫荧光为例,则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和亮绿色耀眼荧光。弱(+)=1,中(++)=2,强(+++)=3。至少随机观察5-10个HPF。然后根据(+)% x 1 +(++)% x 2 +(+++)% x 3计算出数值;总数值<1.0者为(+),1.0-1.5者为(++), >1.5者为(+++)。

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