使用说明书

检测原理

试剂盒采用双抗原一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被牛布氏杆菌捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中牛布氏杆菌（Brucella）的存在与否。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

操作注意事项

1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3. 预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到

试剂盒的的最佳检测效果。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注

微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无

阴性对照0.5mL 0.5mL 无

阳性对照0.5mL 0.5mL 无

检测抗原-HRP10mL5mL无

20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释

样本稀释液6mL3mL无

底物A6mL3mL无

底物B6mL3mL无

终止液6mL3mL无

封板膜2张2张无

说明书1份1份无

自封袋1个1个无

7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性

试剂盒性能

1. 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。

2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6个月

免责声明

1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。