牛抗凝血酶3(AT-III)elisa试剂盒组成
130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(80U/L)0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
牛抗凝血酶3(AT-III)ELISA试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
40U/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液
20U/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液
10U/L3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液
5.0U/L2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液
2.5U/L1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
牛抗凝血酶3(AT-III)ELISA试剂盒测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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