elisa试剂盒转化质粒的快速检测基本方法

煮沸缓冲液：蔗糖 8%

Triton X-100 1.5%

EDTA(pH 8.0) 50mmol/L

Tris-HCl(pH 8.0) 10mmol/L

LB培养基(同C)

氨苄青霉素(AP)(同D)

试验程序

1.选取白色单菌落，接种到3ml含AP的LB液体培养基中，37℃下振荡培养过夜。

2.将培养物等分成2份按菌落编号，每一菌落编号切勿出错。一份于4℃下保存备用，每一菌落编号切勿出错。另一份转入Eppendorf中，7000rmp离心2min.，弃去上清液，吸干残留液体。

3.将沉淀菌体细胞悬浮于350μl煮沸缓冲液中，加入25μl溶菌酶后，涡旋混合。

4.将管置于100℃沸水中煮40s.，取出立即在12000rmp条件下离心15min.。

5.取10μl上清液，加入溴酚蓝染料后，在0.8%琼脂糖胶上电泳。

6.在紫外灯下根据分子量检测插入片断的完整性。

如果不能确定转化片断的大小，则要进一步杂交、测序分析。选取经检测含有完整目的DN断的菌落，转接于2ml TB培养基(每升16g胰化蛋白冻/10g酵母提取物/5g氯化钠)中，37℃下振荡培养过夜，取850μl菌液加入到一2ml的冻存管中，再加入150μl 50%的甘油，混匀后置于液氮中快速冷冻，再置于-70℃条件下保存。