人白介素21(IL-21)酶联免疫试剂盒检测原理_技术交流_仪器仪表技术文献

人白介素21(IL-21)酶联免疫试剂盒检测原理

提供者：北京雅安达生物技术有限公司发布时间：2016/12/26 14:12:04 阅读次数：510次进入该公司店铺

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人白介素21(IL-21)酶联免疫试剂盒检测原理

检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-21抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中
的人IL-21会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-21抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-21抗体与结合在包被抗体上的人IL-21结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-21浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-21的浓度。
样品收集:
1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻
存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。
8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先
做预实验，以确定稀释倍数）。