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RNase A核糖核酸酶A,来源于牛胰腺

提供者:上海圻明生物科技有限公司   发布时间:2016/12/12 9:22:16  阅读次数:454次  进入该公司店铺

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核糖核酸酶A(Ribonuclease A,常用缩写RNase A),一种含4个二硫键的单链多肽,分子量约为13.7kDa(氨基酸序列)。作为一种核糖核酸内切酶(endoribonuclease),特异性降解单链RNA上的胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)残基。具体来说,切割识别的是由某核苷酸上的5’-核糖和相邻的嘧啶类核苷酸3’-核糖上磷酸基团形成的磷酸二酯键,从而使得2’, 3’-环磷酸水解为对应的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG经RNase A切割产生pG-pG-pCp 和A-PG)。RNase A切割单链RNA活性最高,推荐工作浓度为1-100μg/ml,兼容于各种反应体系。低盐浓度(0-100mM NaCl),可用来切割单链RNA,双链RNA,以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。然而,高盐浓度(≥0.3M),RNase A仅特异性切割单链RNA。
核糖核酸酶A(RNase A)最常见的应用在于质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA,此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一,可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。另外,本品还可用于RNA酶保护分析、RNA序列分析等分子生物学实验。
注意事项
1) 本品在生产过程中已经过相应方法去除DNase污染,对于常规质粒DNA或者基因组DNA抽提(不需要严格定量DNA水平)的应用,可不需要高温煮沸,直接配制母液即可。对于需要严格控制DNase酶残留的实验,建议高温煮沸或者购买DNase-free, protease-free的RNase A溶液(10mg/ml)(货号:10405ES03)。
2) RNase A会强吸附在玻璃器皿上,建议溶液装到塑料离心管内。
3) 对于同时操作完整RNA实验的研究人员,一定要谨防RNase A引入干扰试验结果的准确性。
4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存液制备
注意:此为RNase A储存液配制的常用方法之一,也可以根据实验室传统的方法,或者参考文献资料使用其他方法制备储存液(如直接溶于10mM Tris-Cl, pH7.5;或者Tris-NaCl溶液)。
1) 利用10mM的醋酸钠(pH5.2)制备10mg/ml 的RNase A 储存液;
2) 00℃加热15min;
3) 冷却到室温,加入1/10体积的1M Tris-HCl(pH7.4),调其pH至7.4(例如,5ml 10mg/ml的RNase 储存液加入500μl 1M Tris-HCl, pH7.4);
4) 分装于-20℃冻存,可稳定保存长达2年。
注意:在中性条件下煮沸RNase A溶液,会有RNase沉淀形成;在更低的pH下将其煮沸,如有沉淀可以观察到,可能由于蛋白杂质存在造成。煮沸之后若发现沉淀,可通过高速离心(13,000 rpm)去除杂质,然后分装冻存。

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