蛋白A定量系统是一个突破性的免疫分析平台，它将基于TaqMan® Assay的qPCR分析的灵敏度和动态范围带到以抗体为基础的蛋白分析物检测中。系统借助邻位连接分析（proximity ligation assay，简称PLA）技术来定量某一目标蛋白。定量蛋白A的方法（如ELISA）受到种种限制，如动态范围窄、灵敏度低和流程费时费力。通常需要对每个样品进行多次稀释或开展重复分析，才能获得落在标准曲线线性范围内的结果。
为了实现最宽的动态范围、最高的灵敏度和重复性，他们开发出一种自动化、基于磁珠的固相PLA平台，适用于MagMAX™ Express-96磁珠处理器。简单的流程仅包含三步（图1）。第一步，制备待测样品和标准品。样品制备包含简单的加热/冷却/离心过程，让与蛋白A分析物结合的IgG变性和分离。下一步，设置平板，而目标蛋白的捕获和探针连接都在MagMAX™ Express-96仪器上自动完成。简单来说，与链霉亲和素包被磁珠偶联的生物素化的蛋白A抗体可用于捕获蛋白A。洗涤之后，邻位探针（结合有寡核苷酸的蛋白A抗体）与蛋白A目标结合。一旦与目标蛋白结合，探针相互靠近，在与邻位探针杂交的夹板寡核苷酸（splint oligo）存在时由连接酶连接。最后一步，通过qPCR扩增连接产物，并根据标准曲线确定目标蛋白的量。
版权声明