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细胞研究中的应用

提供者:上海一研生物科技有限公司   发布时间:2016/9/14 14:50:27  阅读次数:204次  进入该公司店铺

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细胞研究中的应用
在细胞水平检测DNA裂解的原位标记技术已越来越多地被用于组织切片和培养细胞,细胞凋亡时,由于DNA的裂解,形成单或寡核小体的双链相对分子质量小的片段及在相对分子质量大的DNA上形成单的继裂(缺口,nick)。此类断裂可用生物素、地高*或荧光素标记的核苷酸在3`-OH端予以显示。通常采用的酶是DNA聚合酶I或未端脱氧核苷酸转移酶(TdT),前者使核苷酸结合于缺口,需要模板存在,标记方法通常被称为“原位缺口平移”(insitu nick translation,ISNT),后者使核苷酸在双链的断端延伸,不需要模板的存在,其方法被称为未端记(end labeling)、加尾法(tailing reaction)或TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)。上述方法,尤其是TUNEL的应用已很广泛,其优点是可用于原位标记,可用于病理组织,并可进行定量分析。值得注意的是坏死期由于内源性核酸内切酶和蛋白质酶的何等用,DNA被切割成大小不等的片段,也可出现 阳性反应。组织或细胞外理不当时可出现假阳性。因而,TUNEL等方法对凋亡细胞的标记是选择性的。而不是特异性的,TUNEL或其他DNA裂解原位标记的分析应结合阳性细胞的形态,尤其是核的特征,细胞的分布和有无炎症反应,除外非凋亡的阳性反应。

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