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FCM在分子生物学研究中的应用

提供者：青岛捷世康生物科技有限公司发布时间：2016/8/29 8:09:33 阅读次数：303次进入该公司店铺

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FCM在分子生物学研究中的应用

FCM与分子生物学是推动近代医生生物学发展的两项主重要技术，对探讨正常细胞的生长、发育、分化和肿瘤的发生、发展都起着决定性作用。生物化学方法的分子技术有其独特的有点，然而它难以阐明以细胞为基础的分子水平变化。近年来，免疫学家们已制成了一些抗基因蛋白的MoAb，如抗P21，抗C-myc、抗P53等。如此，可将细胞生物技术与分子生物技术结合起来，为研究各个细胞中分子水平的变化及此类物质与其他细胞结构物之间的关系开辟了新途径。Andreeff等率先将FCM引入分子生物学领域。他们用三步间接免疫荧光染色法，以大鼠抗全-ras MoAb（Y13-259）为第一抗体，兔抗大鼠IgG为二抗，FITC-羊抗兔IgG为三抗，处理人或鼠白血病细胞，继用碘化丙啶进行DNA染色。用FCM可定量测定单细胞内P21 ras基因产物表达及细胞周期的关系。他们发现P21 ras在AML细胞中明显高于ALL细胞。P21 ras在G₀/G₁期中变异较大。但它的表达并不随细胞进入S及G₂M期而增大（图）。Darova等发现P53随细胞周期G₁，S，G₂M期而逐增。P53在ALL细胞中明显增加，而在AML中缺如。Herbert等用双激光管FCM以DAPI为DNA染料，SR101为蛋白质染料，FITC-cmyc MoAb进行多参数测定，证明这种技术有利于研究正常细胞增殖与分化，细胞恶性转化及药物或放射治疗后细胞代谢状况。

Dunne等利用FCM的分选系统，将所感兴趣的细胞直接筛到已被溶细胞混合剂所饱和的硝酸纤维滤膜

上，被筛到滤膜上的细胞立即被固定于其上。滤膜经适当的洗脱处理后，再用³²p标记的特异性DNA探针按常规Southern印迹法测定。作者用分化诱导后的U937（原单核细胞白血病细胞株）细胞，用FCM分选出MY7+（CD13）和MY7-细胞。按上述方法筛选一定数量的细胞于数张滤膜上。测定结果证明，在有1000—6000个细胞的滤膜上，C-fosmRNA量与细胞数量呈良好的线性关系。骨髓、胸腺或实体瘤均包含多种不同成分与功能的细胞。利用这种新技术，可以较精确地分离出所需要的细胞，并以细胞为基础地对他们进行多种成分与分子水平的研究。