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实体肿瘤组织单细胞核(裸核)悬液样品的制备

提供者:青岛捷世康生物科技有限公司   发布时间:2016/8/10 8:41:18  阅读次数:328次  进入该公司店铺

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实体肿瘤组织单细胞核(裸核)悬液样品的制备
从新鲜实体瘤组织中直接脱核的方法,是采用一种低渗组织液,造成细胞膜破裂,自行释放细胞裸核进入悬液。本方法的优点是方法简单、易掌握,并可改善样品的变异系数(CV值)。裸核样品的流式分析,仅适用于细胞核DNA含量测量和DNA细胞周期的分析研究。由于细胞膜遭到破坏,引起胞浆的流失,因此不适用于细胞内蛋白质、RNA、酶和酶代谢产物的定量分析,更不适用于细胞膜表面抗原抗体和受体方面的研究。下面介绍一种染色-去污剂溶液(Stain-Detergent Solution)制备裸核悬液的方法。
染色-去污剂溶液的配制 溴化乙啶(EB)10mg,枸椽酸钠1.0g,NaCI564mg,蒸馏水1000ml,非离子去污剂NP-40(标准浓度0.03%)或Triton-X-100 1.0%。
Tris缓冲液:Tris 12.1g,EDTA二钠盐370mg,蒸馏水920ml,HCI(IN)80ml(分析纯),pH7.4。
制备过程1、组织处理,取新鲜肿瘤组织0.5g,用锐剪刀剪碎成1.0mm3组织块,放入10ml试管中。2、立即加入Tris缓冲液5ml,漂洗组织一次,弃去上清。3、加入染色去污剂10ml,放入4℃冰箱12小时左右,间隔2小时振荡一次。4、以50um尼龙网过滤,离心沉淀,既得单分散的裸核悬液。

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