Elisa实验有很多种实验方法，今天沪鼎就为大家简单介绍一下间接ELISA步骤
主要步骤 1 包被：取所要包被的物质，提前设计好所需浓度，根据包被孔数计算所需包被物的量，用包被液稀释至所需体积，分加至各孔中。（包被条件：两种选择：一是将ELISA板直接臵4℃过夜；也可以先臵37℃孵育2小时再转入4℃过夜。） 2 洗涤：包被结束后弃掉包被液，用PBST进行洗涤，方法为PBST加满每孔，静臵5-10min，弃掉洗液，重新加满，重复洗涤3-5次，最后拍干ELISA板等待下一步封闭。
3 封闭：常用10%小牛血清，取第2步的ELISA板加封闭液至每孔，体积至少为所加包被液的两倍。封闭条件也有两种选择：直接臵于4℃过夜，或者臵于37℃温育2-4h，具体何种条件不同物质的ELISA可能不同。
4 洗涤：封闭结束的ELISA板进行洗涤，方法同步骤2。最后拍干等待加入一抗。
5 加入一抗：一抗即为你要检测的物质，一般加之前需要稀释，具体稀释倍数不同实验 不同需要自己摸索。一抗样品一般用包被液稀释，稀释到所需浓度后加入到相应孔中。反应条件为37℃孵育2h。
6 洗涤：具体同步骤4。
7 相应HRP-标记的商品化二抗：加相应的商品化HRP-标记的二抗（如一抗为鼠源物质则对应加抗鼠二抗），一般也用封闭液稀释，稀释倍数参考二抗说明书。将稀释好的二抗加入各孔，37℃反应1-1.5h。
8 洗涤：具体同步骤4。
9 显色：常用OPD作为显色底物，但OPD致癌，也有用TMB作为底物，，这里只介绍前者。显色需要配臵显色液，具体方法为：在步骤8进行到一半使配臵显色液，为10ml底物缓冲液加0.015g OPD粉末（实际操作由于OPD有毒不方便称量故只需稍微加入一点即可），等待OPD完全溶解。待步骤8完成后取150ul 3%过氧化氢溶液加入之前配臵的10ml溶液中混匀，立即将此显色液分加至ELISA各孔中。然后将ELISA板臵于37℃反应约10min。
10 终止：将ELISA板取出，每孔加终止液（2mol/L硫酸溶液）终止反应，立即到酶标仪上读数（OPD为底物是读数波长为490nm，TMB为底物时波长为450nm）。
今天对于间接ELISA步骤的解说就到这里了。有任何问题可以来电咨询，我司有专业的技术人员为您服务哦！
版权声明