ELISA试剂盒的操作细则_行业标准_仪器仪表技术文献

ELISA试剂盒的操作细则

提供者：上海邦景实业有限公司发布时间：2015/9/30 15:18:23 阅读次数：175次进入该公司店铺

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1.正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2.在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:
(1)固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg／ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
(3)酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4)酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。
GABRR2G氨基丁酸A型受体rho2 /GABAA Rρ2抗体
GABABRBPG氨基丁酸B型受体结合蛋白抗体
GRID1谷氨酸受体δ1/GluR-δ1抗体
GRINA谷氨酸受体相关蛋白1抗体
GARP环磷酸鸟苷门控通道蛋白CNG4抗体
Glycine Receptor alpha 1 + alpha 2甘氨酸受体α1+甘氨酸受体α2抗体
Glycine Receptor alpha 3甘氨酸受体α3/GlyR α3抗体
GPRC5DG蛋白偶联受体C5家族亚型D抗体
GPR18G蛋白偶联受体18抗体
GPR65G蛋白偶联受体65抗体
Gax生长终止特异性同源盒基因抗体
GLUR2谷氨酸受体2抗体
Glutamate receptor 3谷氨酸受体3抗体
GLUR4谷氨酸受体4抗体
GRM1促代谢型谷氨酸受体1抗体
GLRA4甘氨酸受体α4抗体
GDF8生长分化因子8抗体
phospho-GSK-3 Beta磷酸化糖原合酶激酶-3β抗体
Glu-Glu TagGlu-Glu tag抗体
GLP-2胰高血糖素样肽-2抗体