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Folin——酚试剂的配置

提供者:北京鼎国昌盛   发布时间:2015/8/17 14:21:56  阅读次数:5395次  进入该公司店铺

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谭*
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一. Folin——酚试剂甲
溶液1):1:2g无水碳酸钠溶于100m10.2mol/l氢氧化钠中(以配制成 5X),
用时稀释5倍。溶液2):0.5g 五水硫酸铜溶于100ml1%酒石酸钾钠
(或酒石酸钠)溶液。将稀释后的
溶液 1 与溶液 2 ,以50:1的比例混合。
混合后即为
Folin——酚试剂甲,此试剂只能用一天,过期失效。
二.Folin——酚试剂乙
原溶液度为2moL/L使用前需稀释一倍,用多少稀释多少,使其最后浓度为
1moL/L,此 为Folin——酚试剂乙应用液。Folin——酚试剂乙原液平时应封闭
贮存于
4°C冰箱中避光保存。
三.操作方法
标准曲线的制作:取14支试管分成两组,按下表顺序加入试剂,混匀,于室
温放置
10分钟。再加入0.5毫升试剂乙,立即摇匀,在室温放置 30 分钟,
然后于
500nm 处比色。测定光密度值。取两种测定的平均值,以蛋白质浓度
为横座标,光密度值为
纵座标,绘制标准曲线为定量的依据。
试剂/管号
0123456
BSA/ml(250ug/ml
00.10.20.40.60.81.0
蒸馏水/ml
1.00.90.80.60.40.20
试剂甲/ml
5555555
试剂乙/ml
0.50.50.50.50.50.50.5

样品测定:
(1)取 1 毫升样品溶液(约含 20-250微克多肽或蛋白质)加入 5 毫升试剂甲
混匀,
于温室放置 10 分钟。(2)加入0.5毫升试剂乙(Folin——酚),立即摇匀,
于室温保温
30 分钟:然后500nm处比色,以 1 毫升水代替样品作空白对照。测定后,
可以从标准曲线中查出未知样品
浓度。若用 0.5 厘米光程的比色杯进行比色,可按下
面方法进行操作:取
0.2 毫升样品溶液(约含 5-100微克多肽或蛋白质),加入 1 毫升
试剂甲(可选用
0.3-0.5 厘米直径的小试管)混匀,10分钟以后,再加入 0.1 毫升试剂乙
,立刻混匀,
30 分钟后比色一般来说,若多肽或蛋白质浓度在 2-25 微克,则采用波长
755nm,而 25 微克以上则采用 500nm比色为宜。

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