1. 溶液准备：

PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4 ，1.8mM KH2PO4 ， 50mM NaCl ， 2.7mM KCl

封闭缓冲液：3%BSA-PBS抗原

2. 程序：

1 ） 对石蜡切片进行脱蜡和水化：3×10min 二甲苯，5min 100%乙醇，5min 95%乙醇，5min 80%乙醇， 5min 70%乙醇，3×5min PBS。

2 ） 修复抗原，PBS洗涤三次，每次5min。

3 ） 室温下，将玻片在3%H2O2-甲醇溶液中浸泡15min封闭内源性过氧化物酶，然后用PBS洗涤三次，每次 5min。

4 ） 加入一抗（用3%BSA-PBS封闭液1:50稀释一抗），37℃湿盒孵育1h。

5 ） 加入Post-blocking室温湿盒孵育30min,然后用PBS洗涤三次，每次5min。

6 ） 加入稀释好的辣根过氧化物酶（HRP）标二抗，室温下湿盒孵育30min。

7 ） 用PBS洗涤玻片5次，每次5min。

8 ） 按照DAB试剂盒说明添加显色液，避光显色30s-5min。用蒸馏水终止显色反应。

9 ） 苏木精进行复染色3min,用蒸馏水冲洗。

10 ） 立即进行脱水和透明：1×5min 70%乙醇，1×5min 80%乙醇，1×5min 90%乙醇，1×5min100%乙醇，2×10min二甲苯。

11 ） 中性树胶封片。抗原