高效液相分析法（HPLC）分析柱的选用
一、高效液相色谱柱的类型及选择
1、高效液相色谱柱的类型 色谱柱是高效液相色谱最重要的部件，它要耐高压及流动相和样品的腐蚀，所以一般都用不锈钢制作。通常按内径大小分为三种；
①、小于2mm的称为细管径柱或微管径柱。
②、2-5mm是常规HPLC色谱柱
③、大于5mm的称为半制备柱或制备柱。
HPLC色谱柱与柱接头都用不锈钢制成，具有耐腐蚀、抗氧化、耐压等优点。此外，也有氟塑料、玻璃和剥离衬里等材料的色谱柱。
为了获得较高柱效能，柱管内表面必须光滑、无刻痕、裂缝及颗粒物，因此内壁必须做抛光处理。HPLC色谱柱通常是直管形，长度在5-40cm间，特殊需要时可以增长。色谱柱一般为直柱，柱内径一般为2-5mm，最常用4mm做左右
2、高效液相色谱柱的选择 稳定的、高性能的色谱柱是建立耐用、重现方法的根本。不同来源的色谱柱可能有很大的差异，即使用同一来源的柱也有差别。因此对色谱柱的选择非常重要。
分离柱有各种长度和直径。在HPLC中内径标准为4-5mm。挑梁应该粒度抑制，机械稳定性好。多数常用的柱填料粒度的范围是4-7um。柱长的范围在10-30cm。
如使用窄径柱（2mm），采用与标准相同的流动相线速度，分析时间可保持不变，窄径柱提供了一些由于标准柱的优点
①、当柱的内径减半时，样品组分的检测器信号增加3倍；
②、溶剂消耗标准柱的1/4，这可以相当大的节省溶剂和处理废液的费用。
③、因为溶剂消耗较低，可以使用非传统或高纯度溶剂；
④、填充密度更具均匀性；
⑤、好的柱渗透性允许较小力度填料，而不会超过HPLC中管用的压力；
⑥、摩擦热散逸好，所以柱径向的温度梯度小；
⑦、多根短柱能够连载一起来增加总柱长而不损失柱效。
柱外效应必须考虑。一般来说，如果使用3um填料的短柱，这就要求使用池体积较小的检测器和内径为1.3-1.8mm的短连接管。
二、色谱柱的填充法
高效液相色谱法的装柱是一项技巧性很强的工作，对色谱分离效果影响很大。根据固定相微粒的大小，填充色谱柱的方法有干法和湿法两种。微粒大于20um可用干法填充。如果微粒直径在10um以下，只能用湿法装柱。
干法填充 是把所需要的填料以少量、等量多次导入柱内，并以适当的力和频率垂直轻叩柱子，这样可以使柱床紧密、均匀。
湿法填充 一般都是把填料和一种所谓的匀浆溶剂按一定比例，如质量分数为10-15%混合。这种匀浆溶剂应担具有合适的粘度和密度，是离子在其中不易沉降；且有良好的分散能力，有利于消除结团效应；还应当不与填料发生不可逆化学吸附或反应；最后又易于洗除。配好的匀浆在超声波下处理数分钟，使其高度分散，然后用泵在40-80MPa的压力下，通过一种加压溶剂（如一万或甲醇）迅速亚茹柱内，此时填料即在柱内淤积呈以紧密均匀的天冲床。
装天后的色谱柱应用标准混合物测定柱效。标准品
3、使用色谱柱的注意事项
①、色谱柱需用标准实验混合物，在标准实验色谱条件下进行检验，此数据将作为鉴定柱子性能变化的参数依据。它将有助于决定神门时候需要再生、修理和更换柱子
②、色谱柱在任何情况下都不能碰撞、玩去或强烈震动。
③、当柱子和色谱仪连接时、配件一定要清晰干净否则易出现吴明峰。
④、配制两种或两种以上洗脱液时，一定要先脱气，在使用，以免长生气泡，影响分析工作的正常进行。
⑤、柱子与进样阀、检测器连接时，不要用力过大，以免压紧螺丝折断。以不漏液为宜，通常现用手拧紧再以扳手旋紧1/4-1/3扣即可。
⑥、高粘度的溶剂（如乙醇、异丙醇等）会增加柱压降，使样品谱代扩宽响柱效。
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