一、概述
Western Blot是利用抗原抗体的免疫反应，先将蛋白通过SDS-PAGE凝胶电泳分离开，再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体上，然后再加上抗体形成抗原抗体复合物，再利用发光或显色的原理将结果显示到膜或者底片上。
SDS-PAGE电泳的高分辨率以及固相免疫测定的特异性和敏感性保证了最终实验结果的准确性。WB是半定量实验，相比较于定性实验有数据分析，但是需要严格的参照标准，因此不是准确的数量关系，这也是与定量试验的不同之处。
二、技术流程
1.根据目标蛋白在细胞中的位置（细胞核中，细胞浆中，细胞膜上）和目标蛋白的性质（变性以及非变性）选择合适的提取蛋白的方法
2.用合适的方法例如Bradford或者BCA法测定蛋白含量
3.根据目标蛋白的大小制作合适浓度的SDS凝胶
4.根据目标蛋白的大小选择合适的电泳电压以及电泳时间
5.根据目标蛋白的大小以及剪切的凝胶的大小选择合适的转膜电流以及转膜时间
6.根据目标蛋白的性质选择合适的封闭方法，例如脱脂奶粉，BSA等方法封闭
7选择合适浓度的一抗进行孵育，洗膜
8选择合适浓度的二抗进行孵育，洗膜
9 ECL发光液进行曝光
三、客户须知
1 检测样本：新鲜的组织或者细胞
2 样本量：检测细胞样本的一个指标的最低细胞含量是1*106，检测组织样本的一个指标的最低组织样品为30mg（建议多提供样本，便于研磨）
3 样本保存：
（1）新鲜的组织样本：迅速冻存。
（2）悬浮细胞：收集完以后，冷的PBS洗3遍，吸净残余的液体，冷冻保存。
（3）贴壁细胞：吸净培养基以后，预热的PBS洗3遍，胰酶收集，再用冷的PBS洗3遍，吸净残余液体，冷冻保存；对于不适合用胰酶收集的细胞（例如胰酶处理会消化掉一部分蛋白或者对于目标蛋白有刺激作用），预热的PBS洗3遍以后，用细胞刮收集细胞，吸净残余的液体，冷冻保存。
4、请提前告诉我们：您样本的种属（人、大鼠、小鼠、兔、猪等）、样本数量、待测指标。
5、样本邮寄：放入冰袋或者干冰及时寄送，建议选择顺丰快递陆运或者中通快递陆运。
四、报告内容及标准
1 目的蛋白曝光照片一张
2 电子版目的蛋白和内参的照片
3 灰度分析数据一份
4 蛋白含量数据
5 完整的实验报告（试验方法，试验参数，实验仪器参数）
五、收费标准及服务周期
收费标准及服务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变，详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。
六、质量保证
良好的实验平台体系，先进的仪器设备以及从事WB实验多年的优质服务团队为您最终满意的实验结果保驾护航。
七、售后服务
本公司会不定期进行顾客回访，以提高我们的服务质量。本条款以所签订的合作合同为依据，详情会因合同内容的不同而有所差异。

实验内容：把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持体，并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。Western使用的探针是抗体，它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。这种技术的作用是对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特异蛋白进行鉴别和鉴定。

八、准备仪器：
仪器：高压锅、玻璃匀浆器、高速离心机、分光光度仪、—20℃低温冰箱、垂直板电泳转移装置、恒温水浴摇床、多用脱色摇床。

试剂：单去污剂裂解液、0.01mol/L PBS (pH7.3)、10％分离胶、4％浓缩校、G250考马斯亮蓝溶液、0.15mol/L NaCl 溶液、2X（5X）SDS上样缓冲液、电泳缓冲液、转移缓冲液、10X丽春红染液、封闭液、TBST、TBS、洗脱抗体缓冲液、显影液、定影液、抗体、化学发光试剂。

杂品与耗材：各种规格的吸头、离心管和加样器；各种规格的烧杯、量筒和平皿等玻璃器材；硝酸纤维素膜，乳胶手套，保鲜膜，搪瓷盘（>20×20cm），X-光片夹，X-光片，玻棒长短各一根，计时器，吸水纸。
Western印迹法由于其操作简便，灵敏度高，是蛋白检测技术中应用最广泛的技术之一。进入上海劲马课题教室。教您不会的，您所不知道的。