血标本细菌学鉴定程序
正常情况下，机体的血液是无菌的，如果检出细菌（排除污染）即有确诊意义。葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、沙门菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌和厌氧菌等均可引起菌血症、败血症和脓毒血症。对临床表现酷似败血症而普通培养呈阴性者，应注意厌氧菌或L型菌感染的可能性。
【材料】
1、可疑败血症患者血标本。
2、肉汤、血琼脂平板。
3、人血浆或兔血浆。
4、0.9%氯化钠溶液、载玻片等。
【操作】
一、血标本的采取
1、尽可能于疾病早期、高热期（阳性率最高）、抗菌药物治疗前采血，并注意以无菌操作技术采集标本，并尽快送检。
2、如已用过抗菌药物，应在化验单上注明使用过何种抗菌药物，以便有关检验人员在进行细菌培养时作适当处理。例如用过青霉素的，则应在培养液内加入青霉素酶；用过链霉素的，则应加入胱氨酸；用过磺胺的，则应加入对氨基苯甲酸；用过四环素族、多黏菌素、链霉素等的，可加入0.3%硫酸镁，以消除药物对细菌的抑制作用，提高阳性率。
3、无菌操作采取静脉血3—5ml，立即注入含30—50ml肉汤培养液的培养瓶中摇匀，以防血液凝固。因为血液中含抗体和补体等抗菌物质，所以血液和肉汤培养液的比例一般以1：10为宜。如果血液过多，抗菌物质未被充分稀释，会影响细菌的生长繁殖；血液过少则细菌数量也少，两者均会影响细菌检出的阳性率。
4、凡疑为厌氧菌引起的败血症时，应按厌氧培养程序对细菌进行分离培养鉴定。血液中因含菌数较少，一般不作直接涂片镜检，首先接种在液体培养液中进行增菌，然后再进行分离鉴定。
二、鉴定程序
三、操作
1、增菌及分纯
（1）将已接种血标本的肉汤培养液置37℃培养，逐日观察，连续9天。无菌生长者则肉汤呈清亮，血液呈鲜红色沉于瓶底（如增菌培养结果为液体培养液外观清亮，应在培养7天后，作盲目转种血平板，血平板经培养后仍无菌生长者，方可报告为无菌生长）；有细菌生长，则可出现肉汤混浊、颗粒状沉淀、菌膜、凝胨、色素产生、血液变为暗红玫瑰色等现象。
（2）如增菌培养液中有菌生长，则用无菌接种环挑取肉汤培养液之底部沉淀，划线接种于血平板上，置37℃培养18—24h小时。
2、形态学初步鉴定：观察血平板上菌落特征，取菌落涂片作革兰染色镜检，根据菌落特点，结合染色结果得出初步鉴定结论。
3、生化鉴定
（1）触酶实验（过氧化氢酶实验）：用接种环挑取固体培养液上的菌落，置于洁净的试管内或玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液数滴，观察结果。
结果判定：于半分钟内有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性。
绝大多数细菌均产生过氧化氢酶，但链球菌属的细菌其触酶实验 阴性。故常用此实验来鉴别葡萄球菌和链球菌。此实验不宜用血平板上的菌落，因红细胞内含有血红素，而血红素具有过氧化氢酶活性，故红细胞可导致触酶实验假阳性。此外，在陈旧培养物上细菌可失去触酶活性。
（2）葡萄球菌凝固酶实验：葡萄球菌凝固酶一般是由致病性葡萄球菌产生的一种能使枸橼酸钠或肝素抗凝的人或兔血浆发生凝固的酶类物质。血浆凝固酶实验被广泛用于常规鉴别金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌，是致病性葡萄球菌的一个主要鉴定依据。
（3）耐热脱氧核糖核酸酶实验：致病性葡萄球菌产生一种耐热的DNA酶，能分解DNA。非致病葡萄球菌虽也能产生DNA酶，但不耐热。因此，耐热DNA酶测定可作为鉴定致病性葡萄球菌的一个重要指标。
（4）甘露醇发酵实验：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管，其上覆盖无菌液体石蜡油，37℃孵育18—24h小时观察结果。致病性的葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸，而非致病性的葡萄球菌如表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌均不能发酵甘露醇。