猪圆环病毒2型（PCV-2）抗体检测试剂盒说明书

一、介绍：

PCV-2抗体检测试剂盒是用ELISA来定量检测猪圆环病毒2型抗体。试剂盒是用重组PCV-2的N蛋白包被，用来检测血清中N蛋白抗体。

二、试验原理：

VDPro® PCV2抗体检测试剂盒通过间接ELISA检测血清中PCV-2抗体，用重组N蛋白包被，酶标抗体为猪抗IgG。实验操作是加样，然后孵育，洗涤；再加入酶标抗体，如果血清中含有N蛋白抗体，则抗体会与酶标板上包被的重组N蛋白结合，酶标抗体也会与血清中N蛋白抗体结合，加入底物后，颜色将会变深。如果血清中没有N蛋白抗体，颜色变化会很小，或不发生变化。

三、试剂盒内容：

1、PCV-2 NC蛋白包被板 5块

2、10倍洗液 200毫升

3、血清稀释液 200毫升

4、酶结合抗体 50毫升

5、阳性血清对照 2毫升

6、阴性血清对照 2毫升

7、TMB底物液 60毫升

8、终止液 30毫升

四、样品处理：

1、血清样品要尽可能新鲜；

2、大中型猪场监测时，每群（后备母猪、经产母猪、断奶仔猪等）采样不少于35头份；

3、备检血清长期保存应存放在-20度条件下；

4、严禁使用严重溶血或污染的样品来检测。

五、注意事项：

1、使用之前请仔细阅读使用说和操作明；

2、试剂盒储存条件：4-8℃；

六、实验前准备：

1、洗液10倍稀释：如20ml洗液，加入180ml去离子水混匀，备用。

2、TMB底物：使用前恢复到室温，因为低温可能导致不显色。

七、样品稀释：

1、准备好样品稀释板或微量试管；

2、待检血清样品按100倍稀释，分步稀释：即先加入90微升样品稀释液，再加入10微升的样品血清，混合均匀，再取90微升样品稀释液，加入10微升经过第一步稀释的血清，混合均匀即可。（阳性对照和阴性对照不要稀释）；

3、稀释后的样品还可以同时用来检测PRRSV（美洲株） 、PRRSV（欧洲株）。

八、操作步骤：

1、使用前将试剂盒所有组件恢复到室温，取出抗原包被板；

2、标记好样品、阳性对照和阴性对照，每孔加入稀释后的血清样品100ul；

3、加入阳性对照、阴性对照各100ul；室温孵育30分钟；

4、洗板：每孔加入洗涤液300ul ，洗涤3次，最后在吸水纸上拍干；

5、每孔加入100ul酶标抗体，室温孵育30分钟；

6、重复步骤4，洗涤5-6次；

7、每孔加入TMB底物反应液100ul，室温暗处放置15分钟；

九、读数：

每孔加入50ul终止液，在酶标仪450nm波长处读数。

十、结果判定：

1、实验有效性判定

阳性对照OD值≥0.5 阴性对照OD值≤0.3

2、判定标准：

SP值的计算方程式：SP=【（样品值-阴性值）/（阳性值-阴性值）】

SP值≥0.4判为阳性； SP值＜0.3判为阴性； 0.3≤SP值＜0.4判为可疑。

注：1、检测结果不能区分感染阳性和免疫阳性；

2、如果检测结果为可疑，请一个月以后进行再次检测；

3、如果有阳性结果异常的血清样品，计算出该组样品SP平均值，有助于提供更多血清学分析信息。