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豚鼠血清和血浆的操作方法

提供者:杰辉生物(北京)科技发展有限公司   发布时间:2013/12/5 16:55:44  阅读次数:581次  进入该公司店铺

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梁**
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豚鼠血清和血浆的操作方法

常用血液抗凝剂

剂名

抗凝力

机理

应用

禁忌

10%草酸钾0.2ml抗凝10ml 的血与Ca2+结合成不溶性草酸钙而抗凝血非蛋白氮二氧化碳结合力血K+
血Ca2+
草酸钠1~2mg抗凝1ml的血与Ca2+结合成不溶性草酸钙而抗凝血凝血酶原时间及复钙时间测定血K+
Ca2+
3.8%枸橼酸钠6mg抗凝1 ml的血与血中生成不溶性离子化的枸橼酸钙,阻止血液凝固输血、凝血象1:9血沉1:4
双草酸盐(草酸钾、草酸胺)0.5ml抗凝5ml的血保持红细胞形态不变RBC压积测定
草酸钾3g、氟化钠1g混合剂4mg抗凝1ml的血抑制葡萄糖分解而保持血糖浓度血糖测定BUN
(尿素氮)
肝素0.1ml抗凝5~10ml的血;15±2.5IU(干粉)抗凝1ml血抑制凝血酶原转为凝血酶血氨
血气分析
3P试验
EDTA-K21.5~2.2mg(干粉)抗凝1ml血与Ca2+结合成不易电离的可溶性络合物血细胞计数凝血象,血小板功能

操作步骤:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于1.0 U/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月

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