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豚鼠血清和血浆的操作方法
点击次数：582 发布时间：2013/12/5 16:55:44
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梁**
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豚鼠血清和血浆的操作方法
常用血液抗凝剂
| 剂名 | 抗凝力 | 机理 | 应用 | 禁忌 |
| 10%草酸钾 | 0.2ml抗凝10ml 的血 | 与Ca2+结合成不溶性草酸钙而抗凝血 | 非蛋白氮二氧化碳结合力 | 血K+ 血Ca2+ |
| 草酸钠 | 1～2mg抗凝1ml的血 | 与Ca2+结合成不溶性草酸钙而抗凝血 | 凝血酶原时间及复钙时间测定 | 血K+ Ca2+ |
| 3.8%枸橼酸钠 | 6mg抗凝1 ml的血 | 与血中生成不溶性离子化的枸橼酸钙，阻止血液凝固 | 输血、凝血象1：9血沉1：4 | |
| 双草酸盐（草酸钾、草酸胺） | 0.5ml抗凝5ml的血 | 保持红细胞形态不变 | RBC压积测定 | |
| 草酸钾3g、氟化钠1g混合剂 | 4mg抗凝1ml的血 | 抑制葡萄糖分解而保持血糖浓度 | 血糖测定 | BUN （尿素氮） |
| 肝素 | 0.1ml抗凝5～10ml的血；15±2.5IU（干粉）抗凝1ml血 | 抑制凝血酶原转为凝血酶 | 血氨 血气分析 | 3P试验 |
| EDTA-K2 | 1.5～2.2mg（干粉）抗凝1ml血 | 与Ca2+结合成不易电离的可溶性络合物 | 血细胞计数 | 凝血象，血小板功能 |
操作步骤：
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于1.0 U/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月
原创作者：杰辉生物（北京）科技发展有限公司
