提供者：上海北诺生物科技有限公司 发布时间：2013/8/22 14:28:59 阅读次数：1062次 进入该公司店铺
标签： DNA 印迹 杂交
杂交分析的原理是特定序列的单链DNA分子（即通常标记的“探计”）可与另一个固定了的具有互补序列（“靶”序列）的DNA分子或RNA分子形成碱基配对，杂交分子的稳定性取决于发生碱基配对的程度，这一技术可检测复杂基因组中的单拷贝基因。
| 实验方法原理 | 本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。 |
|---|---|
| 实验材料 | DNA |
| 试剂、试剂盒 | SDS SSC |
| 仪器、耗材 | 水浴锅 培养箱 |
| 实验步骤 | 1. 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。 2. 将膜的DNA面朝上置于杂交管中，ATP溶液的加入量为约1 ml/cm2 膜，在68℃杂交炉中滚动3 h。 3. 在预杂交即将结束时，于100℃将DNA探针变性10 min，置于冰中。 4. 将杂交管中的APH溶液倒掉，换上等体积的预热的APH溶液（68℃），加入变性探针，68℃滚动下杂交过夜。 5. 倒掉APH液，加入等体积的2×SSC/0.1%SDS，室温下滚动温育10 min。5 min后更换洗膜液。 6. 用等体枳的0.2×SSC/0.1%SDS替换上述洗膜液，室温下滚动温育10 min 后更换洗膜液 7. 如果需要，在42℃，0.2×SSC/0.1%SDS进行15 min 中等严紧度的洗膜2次。 8. 如果需要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS进行15 min 高等严紧度的洗膜2次。 9. 倒掉最后的洗膜液，在室温下用2×SSC漂洗膜，并吸干多余的液体，用塑料膜包裹后放射自显影。 |
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