联系我们

联系人:周经理

点击查看联系方式

技术文章

DNA实验技术:DNA印迹杂交分析实验

点击次数:1063 发布时间:2013/8/22 14:28:59
商家名片
周**
联系我时,请说明是阿仪网看到的,谢谢!
  • 电话: 02*******393
  • 手机: 15******770
  • 微信:
  • 交换名片后展示联系方式 → →

标签: DNA 印迹 杂交

杂交分析的原理是特定序列的单链DNA分子(即通常标记的“探计”)可与另一个固定了的具有互补序列(“靶”序列)的DNA分子或RNA分子形成碱基配对,杂交分子的稳定性取决于发生碱基配对的程度,这一技术可检测复杂基因组中的单拷贝基因。

实验方法
  • 放射标记法
实验方法原理
本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。
实验材料
DNA
试剂、试剂盒
SDS SSC
仪器、耗材
水浴锅 培养箱
实验步骤
1. 用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。
2. 将膜的DNA面朝上置于杂交管中,ATP溶液的加入量为约1 ml/cm2 膜,在68℃杂交炉中滚动3 h。
3. 在预杂交即将结束时,于100℃将DNA探针变性10 min,置于冰中。

4. 将杂交管中的APH溶液倒掉,换上等体积的预热的APH溶液(68℃),加入变性探针,68℃滚动下杂交过夜。
5. 倒掉APH液,加入等体积的2×SSC/0.1%SDS,室温下滚动温育10 min。5 min后更换洗膜液。
6. 用等体枳的0.2×SSC/0.1%SDS替换上述洗膜液,室温下滚动温育10 min 后更换洗膜液

7. 如果需要,在42℃,0.2×SSC/0.1%SDS进行15 min 中等严紧度的洗膜2次。

8. 如果需要,在68℃,0.1×SSC/0.1%SDS进行15 min 高等严紧度的洗膜2次。

9. 倒掉最后的洗膜液,在室温下用2×SSC漂洗膜,并吸干多余的液体,用塑料膜包裹后放射自显影。

原创作者:上海北诺生物科技有限公司

相关产品

  • 友情链接
  • 热词推荐
在线咨询5分钟应答

提交