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胶体金标记试剂的检测

提供者:上海金穗生物科技有限公司   发布时间:2012/9/20 9:09:50  阅读次数:453次  进入该公司店铺

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崔**
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胶体金粒子在pH值接近蛋白质的pI时,二者容易形成牢固的结合物。胶体金粒子可以广泛地与抗免疫球蛋白抗体、蛋白A、链霉亲合素等结合。由于结合的蛋白可与金粒子缓慢地分离,因此,胶体金试剂在使用前应该通过洗涤去除游离蛋白。

金标记最初用于电子显微镜研究,但亦可用于光学显微镜,得到比酶标记方法较高的分辨率,而且,可避免底物的准备及内源性酶活性干扰等问题。金标记在光学显微镜水平虽缺乏敏感性,但应用光化银增强显影方法克服了这一问题。
非扩大的金标记可直接用于光学显微镜检测,在明视野下,依据反应强度的不同,标记范围从淡粉色到深红色,Nomarski不同的干扰与光学显微镜形成对照,使标记物呈现深红色到黑色。使用银增强方法,金粒子由金属银包被形成一种黑褐色标记物,通过明视野极易观测。胶体金标记方法可与许多组织化学染色方法相配合。金标记反应亦很容易控制,因为染色的呈现过程可在光学显微镜下直接监测,并可有控制地继续进行。
1.需要的溶液和特殊设备
0.5mol/L的枸橼酸钠(pH3.5) 5.6%羟苯醌(避光保存);
0.73%乳酸银(避光保存);
1%乙酸
标准的固定液。
检测用的暗室,光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。
2.操作步骤
(1)在蒸馏水中短暂地漂洗标本片,标本片可以在染色后直接检测或者用银增强处理后观察,用Gelvattol或者Mowiol封片;
(2)银增强方法,转移样本到暗室中。检测剂的准备:混合2份0.5mol/L枸橼酸钠(pH3.5),3份5.6%羟苯醌和12份水。使用前再直接加3份0.73%乳酸银;
(3)将金标记物处理的标本片浸泡于此检测液中,室温孵育2~3min;
(4)用1%乙酸短暂地漂洗,并在标准摄影固定液中固定数分钟;
(5)优化:如果需要,进行复染;
(6)样品用DPX封片。

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