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教你一招:细胞被支原体污染后的处理办法

提供者:北京缔一生物科技有限公司   发布时间:2022/7/14 11:58:50  阅读次数:3663次  进入该公司店铺

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细胞被支原体污染,解决方案

方法一:确认细胞已被支原体污染,终止试验,丢弃所有被污染的细胞和耗材。

重新复苏细胞,注意选用未被污染的细胞株、血清和培养基,并规范操作。

方法二:对于珍贵的,样品不可再得的细胞,或价格昂贵的种子细胞,不但无法丢弃,而且作为种子细胞,还需要清楚支原体污染。

此时,需选用特异性的支原体杀除剂,清除污染,保护细胞。

目上有效的方法是是德国的一款利生物试剂,由Minerva公司生产,品名Mynox®。

此试剂可在2-3小时内将支原体主动杀除。特别适合细胞保种。

Mynox®为枯草杆菌中提取出的生物制剂,加入培养液中,可特异性地与支原体膜结合,改变膜通透性。通过此生物物理的方法,2~3小时内,即可把细胞中的支原体杀除掉。因为细胞膜结构与支原体膜不同,故Mynox®不会与细胞膜结合,因此无细胞毒性。

注意:3小时后,需将此试剂洗脱,将细胞更换到新的培养耗材和培养液中,重新培养。

此时,不应使用PCR方法检测细胞中支原体。由于支原体解体,故PCR结果为假性强阳性。

Mynox®杀除支原体功能强大有效,但价格较贵。

方法三:对于已耗费很多时间,大量扩增起来的细胞,或经过基因转染、体外刺激等大量工作处理过的细胞,如果发现细胞被支原体污染了,怎么办?此时由于期工作量巨大,使操作人员无法丢弃已有细胞。

但由于价格原因,又无法使用方法二提到的昂贵试剂杀除细胞上的支原体,

同时,实验人员还需要清除细胞上的支原体污染,让实验得以往下推进,以终获得准确的实验数据。

此时,实验者可选用对支原体的抑制剂,通过对细胞的期处理,中期加药,逐步通过4代左右的培养,得以将支原体污染清除,确保试验顺利推进,结果准确。

全此类试剂众多,笔者周围的实验人做过很多尝试,其中效果确切且性价比较高的当属德国Minerva公司的ZellShield®祛除剂。

它的原理是:通过抑制支原体增殖中DNA和蛋白的合成,达到抑制新的支原体增殖的目的。属复合型的新型抗生素。

注:使用ZellShield®时,不需使用链青霉素。

教你一周:细胞被支原体污染后的处理办法

操作步骤:

第1步:研究发现,98%的支原体污染发生在细胞间隙。因此,先要把细胞消化下来,放入离心管,悬浮冲洗,离心,弃上清,反复三次。此时可将细胞上大部分的支原体去除,为进一步加药抑制做好准备。

第2步:培养液中加入1%的ZellShield®,细胞进行正常培养。新的支原体增殖受到抑制,旧的支原体随着细胞的换液逐步减少,通过4代左右的培养,细胞中的支原体基本可被清除。

有些细胞保种中心,当珍贵细胞被支原体污染后,会将Mynox®和ZellShield®结合使用,效果确切,结果令人满意。


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