MTS比色法细胞繁殖定量检测试剂盒产品说明书

保存染色液（Reagent B）和结合液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照和反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于直接法染色工作液配制的容器

15毫升锥形离心管：用于间接法染色工作液配制的容器

培养箱：用于反应孵育

酶标仪：用于比色测定

完全细胞培养基（12052）：用于细胞的继续培养

实验步骤

一、 间接法

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）和结合液（Reagent C）在室温下融化，稀释液（Reagent D）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出4.5毫升稀释液（Reagent D）到新的15毫升锥形离心管，加入500微升染色液（Reagent B）和25微升结合液（Reagent C），混匀后，在室温下静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

1． 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板

2． 小心抽去每孔中的培养液

3． 小心加入xx微升清理液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里

4． 小心抽去每孔中的清理液（Reagent A）（注意：确保培养孔中无任何液体残留）

5． 小心加入xx微升染色工作液到96孔板中每一个孔里

6． 放进37℃培养箱里，孵育30分钟，或直至呈现棕色（注意：孵育后，可见溶液的颜色由黄色变成棕色）

7． 即刻放进酶标仪测读：波长490nm

8． 加入150微升用户自备的完全细胞培养液到96孔板中每一个孔里

9． 放回37℃，5%CO2细胞培养箱里继续培养

二、 直接法

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）和结合液（Reagent C）在室温下融化。然后移出xx毫升染色液（Reagent B）和xx微升结合液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管，混匀后，在室温下静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

1． 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板

2． 确保96孔板中每一个孔含有100微升细胞培养液

3． 小心加入xx微升染色工作液到96孔板中每一个孔里

4． 放进37℃培养箱里，孵育1小时（注意：对于不敏感细胞或生长缓慢细胞，可以延长孵育时间至4小时） 

5． 即刻放进酶标仪测读：波长490nm

6． 放回37℃，5%CO2细胞培养箱里继续培养

注意事项

1． 本产品为200次（直接法）和400次（间接法）操作

2． 操作时须戴手套

3． 工作液配制，需根据具体需求调整试剂使用量

4． 使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过2小时，且注意避光

5． 整个操作须无菌操作

6． 建议96孔板里的细胞量在10000至500000范围为理想状态

7． 孵育时，须避光

8． 试剂使用后，即刻放回冰箱保存

9． 不同细胞对于染料的敏感性不同，因此必要时，可以延长孵育时间

10． 对于敏感细胞，不要过度孵育，否则降低检测的敏感性

11． 背景吸收值为0.1－0.2为理想状态

12． 悬浮细胞（例如血白细胞等）可采用直接法

13． 本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂盒

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感