人淀粉样蛋白β寡聚体检测试剂盒（82E1特异性）
（日本IBL 27725）
简介
阿尔茨海默病（AD）是淀粉样蛋白β（Aβ）肽在脑中积累的神经退行性疾病，主要症状是认知功能下降。一般认为凝聚成不溶性纤维（原纤维）的Aβ形成老年斑，这使神经元变异并发展出疾病的症状。（这被称为“淀粉样蛋白假说”）。
然而，由于作为缩合过程的中间体的可溶性Aβ寡聚体具有强烈的突触作用伤害作用，“寡聚体假说”现在变得越来越有效，认为该疾病由于认知功能下降而发展。据报道，当从细胞分泌的或从AD患者脑中提取的Aβ寡聚体被注射到大鼠脑中时，其引起突触功能障碍并研究记忆丧失。此外，实际上也观察到AD患者的脑内Aβ寡聚体与健康个体相比正在增加。
实验原理
该试剂盒采用的是固相夹心原理。样品和酶标记抗体的主要反应是在U板上进行初次温育，将该温育的混合物加入到包被板中并进行第二次反应。洗涤去除未与包被抗体结合的组分，使用四甲基联苯胺（TMB）作为着色剂（色原）。显色的强度反映了与抗人Aβ（N）（82E1）小鼠单克隆抗体结合的分子的量，特异性识别人Aβ的N末端，具有两个或更多个表位。测量结果以摩尔浓度计算，作为Aβ（1-16）上标准化的相对值。
检测范围
18.98-1215pmol/L
预期用途
1.该试剂盒可在血清、EDTA-血浆和脑组织提取物中检测与两个或多个表位（低聚物，带有蛋白质的聚合物等）的抗人Aβ（N）（82E1）小鼠单克隆抗体结合的人Aβ分子。
2.由于结果以Aβ二聚体标准摩尔浓度计算，与检测到的各种分子的重量或数量不成正比。
试剂盒组成
1. 微孔板，96T，包被有抗人Aβ(N)(82E1)小鼠IgG单抗
2. 标记抗体浓缩，30X，0.1ml，HRP标记的抗人Aβ(N)（82E1）小鼠IgG 单抗
3. 标准品，0.5ml，2支，人Aβ(1-16)二聚体
4. EIA缓冲液，30ml
5. 标记抗体稀释液，12ml
6. 着色剂，TMB，15ml
7. 终止液，12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液，50ml
9. U-板，96孔，用于初次温育
准备步骤
试验所需材料但试剂盒未提供
1. 酶标仪（450nm）
2. 移液器和枪头
3. 有刻度的烧杯和量筒
4. 去离子水
5. 冰箱（4℃）
6. 坐标纸（对数-对数）
7. 吸水纸
8. 洗瓶
9. 一次性试验管
试剂准备
1. 洗涤缓冲液制备：先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内用完
2. 标记抗体的制备：用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍，即得。
例：如果只测一条板，8孔，则需要标记抗体160ul（6ul的标记抗体+174ul的标记抗体稀释液，混匀，使用时每孔加20ul）
此步骤应在使用标记抗体之前完成。可稳定至有效期。
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内，保存在4℃
3. 标准品的制备：吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内，充分混匀，得到2430pmol/L的人Aβ二聚体标准品。本试剂盒附带的标准品可以在复溶后冷冻保存，但是不能重复冻融。
4. 标准品稀释在U板上进行，如图（1）所示，标准品的系列稀释使用过U板的一个板条（A-H），由于我们建议重复测量构建标准曲线，请同时准备两个标准品稀释序列。如：A1-H1和A2-H2.
a. 从A到H的每孔中加入100ul的EIA缓冲液。
b. 向孔A中加入100ul的2430pmol/L标准品溶液，轻轻混匀（约10次）。然后将100ul的混合溶液从A孔加入到B孔中。
c. 用这种方法依次将标准品溶液稀释到孔G。然后，从孔G中取出100ul稀释的标准品溶液。
d. 从A孔到G孔的这7个标准品系列，从1215pmol/L到18.98pmol/L，孔H是0pmol/L的测试样品空白。
第3年
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