β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)检测试剂
(日本IBL 27752)
简介
阿尔茨海默病(AD)的特点是Aβ在大脑皮层内大范围积存，因为颅内积累的Aβ对AD有高特异性，同时基因突变引起的家族性淀粉样变性病也会导致Aβ增加。Aβ与AD的发病机理有着重要的意义。Aβ由膜蛋白-淀粉样前体蛋白(APP)产生，N-末端裂解产生的是β分泌酶，作为蛋白酶在Aβ分泌时发挥作用，主要的β分泌酶被定义为β位淀粉样蛋白裂解酶1(BACE1), BACE2已从此家族中分离出来
实验原理
此试剂盒是一种夹心法的elisa试剂盒，使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂，最终溶液所显示的颜色强度与样品中BACE1的量成正比 检测范围
1.56~100ng/mL
预期用途
仅供研究使用，不能用于诊断
1. 此试剂盒用于脑提取液或细胞裂解液中BACE1的检测
事例1
脑提取液的准备
向脑提取样本中加入0.5ml的裂解缓冲液（10mM Tris(pH7.4),0.15M NaCl,3% TritonX-100,0.3mM PMSF），均化，冰上静置至少3小时，4℃ 70000rmp下离心20min，取上清，然后用EIA缓冲液适当的稀释，即可用于检测
事例2
细胞裂解液准备
向细胞培养板上加入0.5ml的裂解缓冲液（10mM Tris(pH7.4),0.15M NaCl,3% TritonX-100,0.3mM PMSF），超声处理20秒，重复三次，15000rmp下离心15min，取上清用于检测
2. 此试剂盒可用于人，小鼠，大鼠重组和天然的BACE1的检测
试剂盒组成
1. 微孔板，96T，包被有抗BACE1 (N42)兔IgG
2. 标记抗体浓缩，30X，0.4ml，HRP标记的抗BACE1 (C)兔IgG Fab’
3. 标准品，0.5ml，2支，人BACE1 COS⁻⁷ 裂解酶
4. EIA缓冲液，30ml
5. 标记抗体稀释液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
6. 着色剂，TMB，15ml
7. 终止液，1N硫酸，12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液，40X，50ml，0.005%吐温20的磷酸缓冲液
准备步骤
试验所需材料但试剂盒未提供
1. 酶标仪（450nm）
2. 移液器和枪头
3. 有刻度的烧杯和量筒
4. 蒸馏水
5. 冰箱（4℃）
6. 坐标纸（对数-对数）
7. 吸水纸
8. 标准品稀释管
9. 孵箱(37±1℃)
10. 洗瓶
11. 一次性试验管
第3年
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