人瘦素（超敏）酶免试验检测试剂
（日本IBL 27775）
简介
1950年发现隐性肥胖基因突变导致肥胖，且与二型糖尿病综合征的病态肥胖类似。1994年在洛克菲勒大学Freidman团队发现肥胖基因编码形成瘦素。瘦素是由肥胖基因产生的16KDa的分泌型蛋白。脂肪组织产生瘦素并释放至血液中，随着脂肪的累积，血液中瘦素的水平含量也呈增长趋势。瘦素作为lipostat，随着脂肪组织内脂肪的沉积而增加；它还可作为一激素，指令大脑终止食物的消化和增加活动；还证明了可用于标记和控制青春期的开始；另外，近期研究表明，瘦素可通过中枢神经系统抑制骨形成。
实验原理
此试剂盒是一种夹心法的ELISA试剂盒，使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂，最终溶液所显示的颜色强度与样品中瘦素的量成正比
检测范围
15.63~1000pg/mL
预期用途
此试剂盒用于人血清，EDTA-血浆和细胞上清中瘦素的定量检测
重组的和天然的瘦素都可用此试剂盒检测
试剂盒组成
1. 微孔板，96T，包被有抗人瘦素兔子IgG抗体，亲和纯化
2. 标记抗体浓缩，30X，0.4ml，HRP标记的抗人瘦素兔IgG Fab片段
3. 标准品，0.5ml，2支，重组人瘦素
4. EIA缓冲液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
5. 标记抗体稀释液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
6. 着色剂，TMB，15ml
7. 终止液，1N硫酸，12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液，40X，50ml，0.005%吐温20的磷酸缓冲液
准备步骤
试验所需材料但试剂盒未提供
l 酶标仪（450nm）
l 带刻度的量筒与烧杯
l 孵箱（37℃±1℃）
l 吸水纸
l 稀释试管
l 微量移液器和取样吸头
l 去离子水
l 坐标纸（log/log）
l 用于稀释标准品的试管
l 洗涤瓶
试剂准备
1. 洗涤缓冲液制备：先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内用完
2. 标记抗体的制备：用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍，即得。
例：如果只测一条板，8孔，则需要标记抗体800ul（30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液，混匀，使用时每孔加100ul）
此步骤在实验开始前完成
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内，保存在4℃
3. 标准品的制备：吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内，充分混匀，得到2000pg/ml的人瘦素标准品
4. 标准品的稀释：准备8个试管用于标准品的稀释，每管加入230ul的EIA缓冲液
每管的浓度如下
1号管 1000pg/ml
2号管 500pg/ml
3号管 250pg/ml
4号管 125pg/ml
5号管 62.5pg/ml
6号管 31.25pg/ml
7号管 15.63pg/ml
8号管 0pg/ml（试验样品空白）
吸取230ul的标准品于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管，依次连续稀释，标准品范围为1000~15.63pg/ml
5.样品稀释：样品用EIA缓冲液稀释。如果样品浓度事先没有估计，我们建议，先用几个不同稀释比例的样品进行检测，来确定样品最佳稀释比例
第3年
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