人类淀粉样前体蛋白1β25(APL1β25)酶免试验
（日本IBL 27737）
简介
APLP1和APLP2（类淀粉样前体蛋白β1,2）与淀粉样蛋白主结构类似，近年来，有报道称，APLP1衍生得到三种长度型的类淀粉样前体蛋白，APL1β25, APL1β27和APL1β28，都是由脑脊液中的BACE(β-分泌酶)和γ-分泌酶产生，报道表明APL1与Aβ的分泌途径类似，但它不会积存于AD患者脑内，另外，细胞上清中的APL1β28相关产物与脑脊液中APL1β28检测可用于脑内Aβ42的候选标记物
APL1β肽预计将成为AD研究中的生物标记物，此试剂盒可检测人APL1β25
实验原理
此试剂盒是一种夹心法的ELISA试剂盒，使用了两种高特异性的抗体。TMB作为显色剂，最终溶液所显示的颜色强度与样品中APL1β25的量成正比
检测范围
9.38~600pg/mL
预期用途
仅供研究使用，不能用于诊断
此试剂盒用于脑脊髓液，细胞上清中人APL1β25的定量检测
试剂盒组成
1. 微孔板，96T，包被有抗人APL1β25兔IgG
2. 标记抗体浓缩，30X，0.4ml，HRP标记的抗人APL1β(N)兔IgG Fab’
3. 标准品，0.5ml，2支，人APL1β25
4. EIA缓冲液，30ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
5. 标记抗体稀释液，12ml，1%的BSA，含0.05%的吐温20的PBS
6. 着色剂，TMB，15ml
7. 终止液，1N硫酸，12ml
8. 洗涤缓冲浓缩液，40X，50ml，0.005%吐温20的磷酸缓冲液
准备步骤
试验所需材料但试剂盒未提供
1. 酶标仪（450nm）
2. 移液器和枪头
3. 有刻度的烧杯和量筒
4. 蒸馏水
5. 冰箱（4℃）
6. 坐标纸（对数-对数）
7. 吸水纸
8. 标准品稀释管
9. 洗瓶
10. 一次性试验管
试剂准备
1. 洗涤缓冲液制备：先将洗涤浓缩液平衡至室温，充分混匀，然后吸取50ml浓缩液与1950ml的去离子水混匀，即得。配制的洗涤液应保存于冰箱内，并于2周内用完
2. 标记抗体的制备：用标记抗体稀释液将标记抗体稀释30倍，即得。
例：如果只测一条板，8孔，则需要标记抗体800ul（30ul的标记抗体+870ul的标记抗体稀释液，混匀，使用时每孔加100ul）
此步骤在实验前完成
剩余的标记抗体浓缩应装于密封瓶内，保存在4℃
3. 标准品的制备：吸取0.5ml的去离子水至标准品瓶内，充分混匀，得到1200pg/ml的人APL1β25标准品
4. 标准品的稀释：准备8个试管用于标准品的稀释，每管加入230ul的EIA缓冲液
每管的浓度如下
1号管 600pg/ml
2号管 300pg/ml
3号管 150pg/ml
4号管 75pg/ml
5号管 37.5pg/ml
6号管 18.75pg/ml
7号管 9.385pg/ml
8号管 0pg/ml（试验样品空白）
吸取230ul的标准品于1号管混匀，然后从1号管吸取230ul加入2号管，依次连续稀释，标准品范围为600~9.38pg/ml
第3年
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