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甘油三酯(TG)含量试剂盒微板法48T/96T
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
甘油三酯(triglyceride, TG)含量测定试剂盒说明书
(货号:WS0190W微板法96样)
一、产品简介:
甘油三酯(TG)是三分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成
分,也是重要呼吸底物。
甘油三酯(TG)被脂蛋白脂肪酶水解为甘油和游离脂肪酸。甘油接着被甘油激酶(GK)
的催化生成甘油-1-磷酸(G-1-P)。G-1-P被甘油磷酸氧化酶(GPO)氧化生成过氧化氢
(H2O2),(H2O2)与4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物,其在510nm处有特征吸
收峰,通过检测510nm处吸光值即可得出TG含量。
二、试剂盒的组分与配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体100mL×1瓶
4℃保存
试剂一
粉剂mg×1支
4℃保存
用甩几下使试剂落入底部,再加
2.2mL蒸馏水,充分震荡溶解备用。
试剂二
液体10mL×1瓶
4℃保存
试剂三
粉剂mg×1支
-20℃保存用
甩几下使试剂落入底部,再
加
2.1mL
蒸馏水,充分震荡溶解备用
。
试剂四
液体6mL×1瓶
4℃保存
标准品
液体1mL×1支
4℃保存
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。
四、甘油三酯(TG)含量测定:
建议正式实验选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约0.1g组织样本加入研钵中,加入1mL提取液,在冰上进行匀浆,12000rpm,4℃
或室温离心10min,取上清液待测。
【注】:若组织样本为高脂样本或部分为高脂样本,需用无水乙醇进行提取。
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约500万细菌或细胞加入1mL
提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次);
12000rpm 4℃或室温离心10min,取上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为500~1000:1的比例进行提取。
③ 液体样本:澄清的液体样本直接测定,若浑浊则离心后取上清检测。
2、上机检测:
① 酶标仪预热30min,调节波长到510 nm。
② 所有试剂解冻至室温(25℃)。
③ 在96孔板中依次加入:本试剂盒仅供科研使用
2
试剂名称(μL)
测定管
标准管
(仅做一次)
空白管
(仅做一次)
标准品
20
样本
20
试剂一
20
20
20
试剂二
80
80
100
试剂三
20
20
20
试剂四
60
60
60
混匀,室温(25℃)避光孵育30min,于510nm读取各管A值。
【注】1.若测定管的A值大于0.3,则可将样本进行稀释(用提取液稀释)或减少样本加样量V1(如
减至10μL,则试剂二相应增加),稀释倍数D或样本量V1需代入计算公式重新计算。
2.若样本为血清,蛋黄(需用乙醇提取)等高TG样本,可把样本V1降为2.5μL,另用17.5μL
蒸馏水补齐,再按照上述加样表操作测定,则改变后的V1需带入公司计算。
3.若样本自身含有高的甘油背景值或者含有高的抗氧化物质(如VC等),需要增设一个样本
自身对照(即20μL+100μL试剂二+20μL试剂三+60μL试剂四,避光反应20min,510nm读
取吸光值A),测定管减去对照管,代入计算公式计算。
五、结果计算:
1、按样本质量计算:
TG(μg/g重量)=(C标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷(W×V1÷V) ×D
=500×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D
2、按细胞数量计算:
TG(μg/104cell)=(C标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷(500×V1÷V) ×D
=(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白) ×D
3、液体中TG含量计算:
TG(μg/mL)=(C标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷V1×D
=500×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)×D
TG(mmol/L)=(C标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷V1÷Mr×D
=0.782×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)×D
C标准---标品浓度,0.5mg/mL=500μg/mL;Mr---甘油三酯分子量,639;
V---提取液体积,1mL;
V1---样本加入体积,0.02mL;
V2---标准品加入体积,0.02mL;
D---稀释倍数,未稀释即为1;
500---细胞数量;
W---样本取样质量,g。
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