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淀粉去分支酶(DBE)试剂盒24T
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详细内容
本试剂盒仅供科研使用
淀粉脱分支酶(Starch debranching enzyme,DBE)试剂盒说明书
(货号:WS0450F分光法24样)
一、产品简介:
淀粉去分支酶(DBE)(EC 3.2.1.68)属于淀粉水解酶家族,特异性地水解支链淀粉的
α-1,6糖苷键,产生线性的葡萄糖链,在调整支链淀粉分子的链长方面有重要的作用。
采用3,5-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖
含量的变化来得到DBE酶活性大小。
二、试剂盒组分与配制
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体30mL×1
瓶
4℃保存
试剂一
液体25mL×1
瓶
4℃保存
试剂二
粉剂mg×1瓶
4℃保存
临用甩几下,使试剂落入底部,再加
18mL试剂一,于80℃水浴锅中溶解呈透
明状态,待冷却后使用。
试剂三
液体25mL×1
瓶
4℃保存
试剂四
液体8mL×1瓶
4℃保存
标准品
粉剂mg×1支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
可见分光光光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、可调式移液器、水浴锅、台式离
心机、研钵、冰、蒸馏水
四、淀粉脱分支酶(DBE)活性检测:
建议正式实验选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本制备:
称取约0.1g组织,加入1mL提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm,4℃离心10min,取
上清,置冰上待测。
【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例进行提取
2、上机检测:
1
可见分光光光度计预热30min以上,调节波长到540 nm,蒸馏水调零。
2
在EP管中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
对照管
样本
30
30
(95℃煮沸10min的酶液)
试剂二
300
300
37℃孵育30min
试剂三
420
420
试剂四
150
150
混匀,95℃显色10min后,流水冷却至室温后,全部液体转移至1mL
玻璃比色皿中,于540nm处读取吸光值A,ΔA=A测定-A对照。
【注】若ΔA 差值较小,可加大样本量,或延长孵育时间至 1 小时或更长。本试剂盒仅供科研使用
2
则改变后的加样量 V1 或反应时间 T 需重新代入公式计算。
五、结果计算:
1、标准曲线:y=2.207x-0.0238,x是标准品质量(mg),y是ΔA。
2、按照蛋白浓度计算
酶活定义:每毫克组织蛋白每小时水解支链淀粉产生1mg还原糖(以麦芽糖计)定义为
一个酶活力单位。
DBE活力(mg/h/mg prot)=[ (ΔA+0.0238)÷2.207]÷(V1×Cpr)÷T
=30.21× (ΔA+0.0238) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算
酶活定义:每克组织每小时水解支链淀粉产生1mg还原糖(以麦芽糖计)定义为一个酶
活力单位。
DBE活力(mg /h/g鲜重)=[ (ΔA+0.0238)÷2.207]÷(W×V1÷V)÷T
=30.21× (ΔA+0.0238) ÷W
V----加入提取液体积,1 mL;
V1----反应中样品体积,30μL=0.03mL;
W----样品质量,g;
T----反应时间,30min=0.5h;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的BCA蛋白含量检测试剂盒;
附:标准曲线制作过程:
1制备标准品母液(50mg/mL):临用加1mL蒸馏水,充分溶解混匀。
2把母液稀释成以下浓度梯度的标准品:0,5,10,15,20, 25mg/mL。也可根据实际样本来
调整标准品浓度。
3按照测定管加样体系操作,依据结果即可制作标准曲线。
热门标签:淀粉去分支酶(DBE)试剂盒,DBE,ELISA













