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上海瓦兰生物科技有限公司 主营产品:实验仪器,消耗品,分子生化试剂,免疫试剂和细胞培养试剂

第16年

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NADH-谷氨酸脱氢酶(NADH-GDH)试剂盒-植物动物均可48T

价格:¥590

品牌名称:$brandModel.Title型号:48T原产地:中国大陆 更新时间:2026/10/7 7:37:42

产品摘要:谷氨酸脱氢酶广泛分布于生物体中,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作
用。其辅酶是 NADH 或 NADPH,在动植物种两种辅酶都有存在,而以 NADH-谷氨酸脱氢
酶(EC 1.4.1.2)活力为主。

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旗舰版网址:http://www.knbio.net

详细内容

本试剂盒仅供科研使用
1
NADH-谷氨酸脱氢酶(NADH-GDH)试剂盒说明书
(货号:WS5040F 分光法 48 样)
一、产品简介:
谷氨酸脱氢酶广泛分布于生物体中,在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作
用。其辅酶是 NADH 或 NADPH,在动植物种两种辅酶都有存在,而以 NADH-谷氨酸脱氢
酶(EC 1.4.1.2)活力为主。
本试剂盒提供一种快速灵敏的检测方法,样品中的 NADH-谷氨酸脱氢酶特异性作用于底
物谷氨酸并产生 NADH,同时与显色剂反应生成黄色物质,该物质在 450nm 处有大吸收
峰,进而得到 NADH-GDH 的酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体70mL×1瓶
4℃保存
试剂一
液体10mL×1瓶
4℃保存
浓度为1M
试剂二
液体5mL×1瓶
4℃保存
试剂三
液体2.2mL×1支
4℃保存
标准品
粉剂mg×1支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
注:粉剂量在 mg 别,使用用手甩几次或者进行离心,打开直接加入要求的试剂即可。
三、所需的仪器和用品:
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、
研钵、冰和蒸馏水。
四、NADH-谷氨酸脱氢酶(NADH-GDH)活性测定:
1、样本制备:
① 组织样本:
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。12000rpm 4℃离心 10min,取上清
液,置冰上待测。(或按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例进行提取)
② 细菌/细胞样本:
先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液;
超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);12000rpm
4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。(或按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)
为 500~1000:1 的比例进行提取)
③ 液体样本:直接检测。
2、上机检测:
① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。
② 在 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中依次加入:
试剂名称(μL)
测定管
提取液
320
试剂一
200
试剂二
80
样本
160
试剂三
40
混匀,立即 450nm 下读取 A1 值,15min
后读取 A2 值。ΔA=A 2-A1。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】:若ΔA 值过小,可以延长反应时间 T(如由 15min 增至 30min 或 1 小时),
或增加加样体积 V1(如由 160μL 增至 320μL,则提取液相应减少),则改
变后的 T 和 V1 需要代入计算公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线的方程:y =0.0338x - 0.0434,x 是 NADH 摩尔质量(nmol),y 是ΔA。
2、按样本蛋白浓度计算:
单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GDH(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0434)÷0.0338]÷(V1×Cpr)÷T
=12.33×(ΔA+0.0434)÷Cpr
3、按样本鲜重计算:
单位定义:每克组织每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GDH(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0434)÷0.0338]÷(W×V1÷V)÷T
=12.33×(ΔA+0.0434)÷W
4、按细菌/细胞密度计算:
单位定义:每 1 万个细菌/细胞每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GDH(nmol/min/104 cell)=[(ΔA+0.0434)÷0.0338]÷(500×V1÷V) ÷T
=0.025×(ΔA+0.0434)
5、液体中 NADH-GDH 活力的计算:
单位定义:每毫升液体每分钟生成 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
NADH-GDH(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0434)÷0.0338]÷V1÷T=12.33×(ΔA+0.0434)
V---加入提取液体积,1 mL;V1---加入样本体积,0.16mL; T---反应时间,15 min;
W---样本质量,g;
500---细菌或细胞总数,500 万;
Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(0.5nmol/μL):向标准品 EP 管里面加入 1.41ml 蒸馏水(母液需在
两天内用且-20℃保存)。
2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2.nmol/μL。也可根
据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样表操作,根据结果即可制作标准曲线。

热门标签:NADH-谷氨酸脱氢酶(NADH-GDH)试剂盒-植物动物均可

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