本试剂盒仅供科研使用
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土壤硝态氮试剂盒说明书
(货号:WS9130W 微板法 96 样)
一、产品简介:
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素,土壤中的有机物分解生成铵盐,被氧化后变为
硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一,其含量直接关系到作物的产
量与品质。
土壤浸出液中硝酸根离子在 220nm 有明显光吸收而在 275nm 波长处没有吸收峰,通
过测定土壤浸出液在 275nm 处的吸光度,乘以一个校正因素 f 以消除有机质在 220nm 波
长处的光吸收干扰。进而得到土壤中硝态氮的含量。
二、试剂盒的组成和配制:
试剂名称
规格 试剂名称保存要求
备注
试剂一
粉剂 g×1 瓶
4℃保存
临用先加 50mL 的蒸馏水,全部
转移到量筒(自备)中,再加蒸馏
水定容至 600mL。
标准品
液体×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂
三、所需的仪器和用品:
酶标仪、96 孔 UV 板(用于紫外光波长下的测定)、蒸馏水、天平、常温离心机、量筒、
振荡培养箱。
四、土壤硝态氮的测定:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
1、样本处理
取约 1g 新鲜土样,若鲜土呈松散状,尽可能过 40 目筛网备用。
【注】: 1、土壤经风干或烘干易引起 NO3- -N 变化,故一般都用新鲜土样测定。
2、硝酸根为阴离子,不为土壤胶体吸附,且易溶于水,很易在土壤内部移动,在土壤剖面上
下层移动频繁,因此测定硝态氮时注意采样深度。
2、上机检测:
① 酶标仪预热 30min 以上。
② 在 5mLEP 管中加入:
测定管
空白管(仅做一次)
鲜土(g)
1
试剂一(mL)
5
5
25℃,220rpm/min 往复式振荡培养 1h,
混匀(成浑浊液状态)用慢速定性滤纸过滤,澄清的滤液待测。
取 200μL 滤液至 96 孔板中,220nm 分别读吸光值 A1、A2,再于
275nm 分别读吸光值 A3、A4;
A 测定管=A1-(A3×f),A 空白管=A2-(A4×f)
△A=A 测定管-A 空白管
注:f 为矫正因素 2.23。
【注】若测定管于 220nm 的 A 值大于 1,需用试剂一稀释滤液使 A220nm 的值在 1 以内,
稀释倍数 D 需代入公式计算。本试剂盒仅供科研使用
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 0.1305x - 0.0017;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值△A。
2、土壤硝态氮(NO3 --N)含量(mg/kg 鲜土)=(△A+0.0017)÷0.1305×V÷W×D
=38.32×(△A+0.0017)÷W×D
V---反应总体积,5mL;
D---稀释倍数,未稀释即为 1;
W---实际称取鲜土质量,g。
【注】:低检出限为 0.5μg/g。
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(100μg/mL)。
2 用试剂一把母液稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 1, 2, 3, 4, 5. μg/mL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 直接取不同浓度的标准品 200μL 至 96 孔板中,分别于 220nm 和 275nm 读吸光值 A1、
A2,A 标准品=A1-(A2×f)。根据结果即可制作标准曲线。
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