本试剂盒仅供科研使用
1
土壤淀粉酶(Soil Amylase,S-AL)试剂盒说明书
(货号:WS8130F 分光法 24 样)
一、产品简介:
土壤中的淀粉酶主要来自于微生物,是一种重要的酶制剂。淀粉酶可水解淀粉产生还原
糖,本试剂盒采用 3,5-二硝基水杨酸与终产物还原糖反应生成棕红色物质,在 540nm 处有
特征吸收峰,进而得到土壤淀粉酶活性。
二、测试盒组成和配制:
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用加入 30ml 试剂二,可 80℃水
浴,搅拌至溶解,待用。
试剂二
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲,则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品:
分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、天平、水浴锅、离心机、甲苯。
四、土壤淀粉酶(S-AL)活性检测:
建议正式实验选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
样本和试剂浪费!
1、样本处理:
取新鲜土样或风干土壤,先粗研磨,过 40 目筛网,待测备用。
【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
2、上机检测:
① 培养:在 EP 管依次加入:
试剂(μL)
测定管
对照管
土样(g)
0.1
0.1
甲苯
40
40
25℃静置 15min
试剂一
1000
试剂二
1000
充分混匀,37℃培养 1h,12000rpm,25℃离心 10min,上清液待用
② 分光光度计预热 30min 以上,调节波长为 540nm,蒸馏水调零。
③ 显色反应:在 EP 管中依次加入:
上清液
600
600
试剂三
300
300
混匀,95℃水浴 5min,待冷却后,全部转移到 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)
中,在 540nm 处读取吸光值 A,△A=A 测定管-A 对照管。
【注】若△A 在零附近徘徊,可增加土样质量(如增至 0.2g),或延长培养时间(如增至 3h 或更长),
则改变后的土样质量和反应时间 T 代入公式重新计算。
五、结果计算:
1、标准曲线方程:y = 4.2163x - 0.1044;x 为标准品质量(mg/mL),y 为△A。本试剂盒仅供科研使用
2、酶活单位定义:每克土样每小时催化生成 1μg 葡萄糖为一个酶活力单位。
S-AL(μg/h/g 土样)=[(△A+0.1044)÷4.2163×103×V]÷W÷T
=246.7×(△A+0.1044)÷W
V---反应总体积:1040μL=1.04mL;
T---反应时间,1h;
W---土壤样本实际取样量,g;
附:标准曲线制作过程:
1 制备标准品母液(1mg/mL):从标准品管中称量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL
蒸馏水混匀溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在两天内用且-20℃保存)。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品:0, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6.mg/mL。也可
根据实际样本来调整标准品浓度。
3 在显色反应阶段,按照测定管加样表操作,依据结果即可制作标准曲线。
2