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血清血浆尿液游离RNA提取试剂
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:23
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详细内容
本品特别适用于从血清、血浆中分离纯化包括microRNA和其他小RNA(<200nt)在内的总RNA。本品灵活处理不同起始量的样品，在有效裂解样本的同时，可有效保存RNA的完整性，提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，提取的RNA可用于RT-PCR、Northern Blot和分子克隆等下游实验。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 血清血浆尿液游离RNA提取试剂 | RNAtiqu Circulating RNA Extraction Reagent | 50ml |
自备试剂：、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水(新开封或提取RNA用)。
实验准备及重要注意事项：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用无RNase的水。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并往医院治疗。
4、样品用游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂匀浆后，如不即刻加入，置于⁻⁷0℃可放置一个月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
6、若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I(货号：WE0213)对RNA进行处理。
产品仅用于科研操作步骤：
1、取200μl新鲜或者冻存的血清或血浆，加入3倍体积的游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂。振荡30，充分混匀。
注意：样本加入游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂后，可能会出现沉淀，经过振荡混匀后，沉淀基本消失。若仍有少量沉淀，不影响下游实验，可继续操作。
2、将处理后的样品在室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、向以上溶液中加入，每使用1ml血清/血浆样本用总RNA提取试剂加入0.2ml，盖好管盖，剧烈振荡15，室温放置2-3分钟。
注意：如不能涡旋混匀，可手动快速颠倒混匀2分钟。
4、4℃ 12000rpm离心20分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相转移到一个新的无RNase的离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置30分钟。或-20℃沉淀过夜，效果更佳。
6、4℃ 12000rpm 离心20分钟，弃上清。
注意：离心RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂加入1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8、4℃ 12000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
9、室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在⁻⁷0℃，防止降解。
注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。
储存条件：2～8℃。
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Goldview nucleic acid gel stain 000× in DMSO1 mlLansoprazole35775兰索拉唑
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操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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