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小量质粒快速提取试剂盒(1.5～4.5mL)
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 9:32:24
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详细内容
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 小量质粒快速提取试剂盒(1.5～4.5mL) | Fast Plasmid Mini Kit(1.5-4.5 ml) | 50次|100次|200次 |
试剂盒特点：
离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
注意事项：
本试剂盒适用菌株为XL-1 Blue和DH5α等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应购买本公司的高纯度质粒小量快速提取试剂盒。
所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
溶液P3中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议接种单菌落于1.5～4.5mL加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14～16个小时，可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5～10mL过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。
得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。
洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
操作步骤：（实验请先阅读注意事项）
提示：
① 次使用请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
② 将RNase A全部加入溶液P1中，混匀，每次使用后置于2～8℃保存。
③ 将溶液P3放在冰上预冷。
取1.5～4.5mL过夜培养的菌液，9000rpm离心30，尽可能的倒干上清，收集菌体。
收集超过1.5mL菌液，可以离心弃上清后，在同一个1.5mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。
用250μL溶液P1重悬菌体沉淀，涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
加250μL的溶液P2，温和地上下翻转4～7次使菌体充分裂解，室温放置4分钟。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。
加350μL溶液P3，立即温和地上下翻转4～7次，充分混匀时会出现白色絮状沉淀。
冰上静置3～5分钟，13000rpm离心10分钟，小心取上清。
加入溶液P3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
将上一步所得上清加入吸附柱AC中（吸附柱放入收集管中），13000rpm离心30～60，倒掉收集管中的废液。
加入500μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30，弃掉废液。
加入500μL漂洗液WB，12000rpm离心30，弃掉废液。
将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65～70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。如果需要较多量质粒，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是小体积不应少于30μL，体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量。
人胃动素(MTL)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:MLN Human MTL(Motilin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组MTL浓度。
人克拉拉细胞蛋白(CC16)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:SCGB1A1, CCPBP, CCSP, Uteroglobin, UGB, UP-1, UP1, UGL Human CC16(Clara Cell 16kD protein) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组CC16浓度
人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP4/CD36)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:GPIV, FAT, GP3B, GP88, PASIV, SCARB3, BDPLT10, CHDS7, gpⅢb, CD36 Molecule(Thrombospondin Receptor) Human GP4/CD36(Platelet Membrane Glycoprotein Ⅳ) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组GP4/CD36浓度
Tokinolide B 112966-16-2 中文名： 分子式：C24H28O4 组织KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定性检测试剂盒20次
Methyl 4-O-feruloylquinate 195723-10-5 中文名： 分子式：C18H22O9 HumanPlacealalkalinepkosphatase,PLAPELISAKit人胎盘碱性0酸酶(PLAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Trehalose 99-20⁻⁷ 中文名：海藻糖 分子式：C12H22O11 兔子脱氧酚/脱氧啉(DPD)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Chlorogenic acid 327-97-9 中文名：绿原酸 分子式：C16H18O9 Human plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 人纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)ELISA试剂盒
Ethyl rutinoside 187539-57⁻⁷ 中文名：芸香糖乙苷 分子式：C14H26O10 HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit 人可溶性白细胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
小量质粒快速提取试剂盒(1.5～4.5mL)3,3-Dimethylacrylic acid 541-47-9 中文名：千里光酸 分子式：C5H8O2 兔子紧张素1型受体(AT1)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Campsiketalin 93675-96-8 中文名： 分子式：C10H20O4 Rat von Willebrand factor / ristocetin cofactor (VWF) ELISA Kit 大鼠性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒
Macranthoin G 159934-13-1 中文名：灰毡毛忍冬素G 分子式：C26H26O12 Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit 人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
5-O-Ethylcleroindicin D 488138-32-5 中文名： 分子式：C10H16O4 HumanDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISA试剂盒人脱氢表雄同S7(DHEA-S7)ELISA试剂盒规格：96T/48T
5-Hydroxymethyl-2-furoic acid 6338-41-6 中文名：5-羟甲基-2-糠酸 分子式：C6H6O4 组织ITK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
热门标签：小量质粒快速提取试剂盒(1.5～4.5mL)
