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无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5～5mL)
价格：￥ 电议
品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 9:32:24
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详细内容
本试剂盒采用菌体内毒素清除剂，在质粒提取就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本试剂盒提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5～5mL) | Endotoxin-free Plasmid Mini Kit(1.5-5mL) | 50次 |
试剂盒特点：
操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取，增加菌体内毒素清除一步。
去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取试剂盒低5～10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
DNA可以直接用于转染等实验。
储存条件：
常温运输及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低温运输和保存。
使用方法：
一、用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
收集1.5～5mL E.coli饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
加入1mL菌体内毒素清除剂温和混匀后10000～12000rpm离心1分钟，弃上清（含内毒素）。
一次洗涤（1～2步）可以去掉90%以上的内毒素，如果需要，可以再重复上述洗涤操作步骤3次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。
二、从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
先将全部RNase A溶液全部加入到柱式质粒DNA提取试剂盒溶液A中，摇匀后再取用，未用完的柱式质粒DNA提取试剂盒溶液A好在4℃保存。
在第3步所得菌液中加入250μL柱式质粒DNA提取试剂盒溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬（此步在冰上操作效果更佳）。
注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用Tip吸头吹打沉淀至完全混匀。
加入250μL柱式质粒DNA提取试剂盒溶液B（如果溶液B有沉淀，用须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀4～6次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过4～5分钟。
注意：此步处理不能超过5分钟，否则DNA的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，否则基因组DNA断裂产生的片段非常容易污染质粒DNA。溶液B用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液B中的NaOH，降低其效率）。
加入350μL冰上预冷的柱式质粒DNA提取试剂盒溶液C，反复颠倒混匀4～6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少5分钟。
高转速（12000rpm以上）4℃离心5分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
静置2分钟以让质粒DNA与吸附柱充分结合，此步十分重要。
室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。
加入500μL的通用洗柱液，室温12000rpm离心1分钟，弃收集管中废液。
注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
重复上步1次。
室温12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用（如DNA上样时不能沉淀到加样孔中）。
将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管（自备）中，加入30～100μL 65～80℃预热的DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液2.0也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
室温12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
注：由于的吸附柱结合DNA能力较强，如果再加适量DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒DNA（相当于次洗脱的20～30%），但注意不要使用上步得到的DNA洗脱液2.0来洗脱。
操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
人组织因子途径抑制因子(TFPI)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:EPI, LACI, TFI, TFPI1, lipoprotein-associated coagulation inhibitor Human TFPI(Tissue Factor Pathway Inhibitor) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组TFPI浓度
人蛋白C(PROC)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:PROC1, PC, Aurothrombin IIA, Blood coagulation factor XIV Human PROC(Protein C) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组PROC浓度
人血栓调节蛋白(TM)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:THBD, AHUS6, BDCA3, CD141, THPH12, THRM Human TM(Thrombomodulin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组TM浓度
Sitoste 1058-61-3 中文名：豆甾-4-烯-3-酮 分子式：C29H48O 度：96.0% 关键词： 苏里南苦木; 火炬松; 豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA试剂盒
Sitagliptin phosphate 654671⁻⁷8-0 中文名：无水磷酸西他列汀 分子式：C16H18F6N5O5P 度：98.0% 关键词： 小鼠牙本质涎0蛋白 英文名称： Mouse Dein Sialophosphoprotein 规格： 48T/96T 英文缩写： DSP
Sitafloxacin 127254-12-0 中文名：西他沙星 分子式：C19H18ClF2N3O3 度：98.5% 小鼠DNA抗体 英文名称： Mouse Deoxyribonucleic Acid Aibody 规格： 48T/96T 英文缩写： DNA.Ab
Silodosin 160970-54⁻⁷ 中文名：西洛多辛 分子式：C25H32F3N3O4 度：98.0% 关键词： 小鼠氧化酶 英文名称： Mouse Diamine Oxidase 规格： 48T/96T 英文缩写： DAO
中文名：枸橼酸 分子式：C28H38N6O11S 度：98.0% 关键词： 小鼠多巴胺受体D1 英文名称： Mouse Dopamine receptor D1 规格： 48T/96T 英文缩写： DRD1
无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5～5mL)Uzarigenin 466-09-1 中文名： 分子式：C23H34O4 Humanenkephalin,ENKELISA试剂盒人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Odoroside H 18810-25-8 中文名： 分子式：C30H46O8 组织PKCζ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
Neridie B 61671-56-5 中文名： 分子式：C21H28O4 HumanParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit人甲状腺素抗体(TAb)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Neritaloside 465-13-4 中文名： 分子式：C32H48O10 兔子基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Ophiopogonin D 945619⁻⁷4-9 中文名：麦冬皂苷D 分子式：C44H70O16 Human thymus activation regulated chemokine (TAFA/CCL17) ELISA Kit 人胸腺活化调节趋化因子(TAFA/CCL17)ELISA试剂盒
热门标签：无内毒素质粒DNA小提试剂盒(1.5～5mL)
