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详细内容
本试剂盒是根据经典的方法改良得到的门用于提取新鲜或冷冻植物组织基因组DNA(包括叶绿体DNA和线粒体DNA)的试剂盒。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 植物DNA提取试剂盒 | Plant DNA extraction kit | 50次 |
产品特点:
1. 操作快速,整个过程在30分钟内即可完成。
2. 纯度高,A260/A280在1.9左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。提取得到的DNA大小在30-50Kb 之间。
3.产率高,高于大多数同类产品(尤其是基于离心柱的提取产品)。
4. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
储存条件:常温运输及保存,RNase A溶液4℃保存,有效期一年。

使用方法:
注意:溶液A和溶液B容易产生沉淀,溶液B比较粘稠,用均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低,用充分摇匀。
1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后,充分混匀,取0.75mL 加入到10-15mL塑料离心管(常用于培养细菌用)中并放置于65℃待用。
2. 称取植物组织0.1-0.3g左右,剪成微小的碎片,转移到装有溶液A的离心管中短暂匀浆。匀浆过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。也可以液氮研磨后将粉末加入到预热的溶液A中(建议不要在陶器或玻璃研钵中破碎细胞,因为其中的主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA,降低DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。
3. 将匀浆液(包括植物碎片)全部转移到新的1.5mL塑料离心管中。注意:匀浆液较为粘稠,可将1mL 枪头剪去一截后用于转移匀浆液,不能吸取的植物碎片可倒入。
4.在匀浆液中加入0.5倍体积 65℃预热的溶液B,颠倒数次混匀。由于溶液B比较粘稠,可以将1mL 枪头剪去一截再吸取。
5. 加入15μl的RNase A溶液(10mg/mL)。
6. 65℃放置3~5分钟。如果室温放置,DNA产量会降低10-20%。
7. 加入200μl自备,震荡器上充分震荡混匀30。
8. 12000~15000g室温离心2分钟,此时两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清液到一个新的1.5mL塑料离心管中,避免触及中间层的白膜。
9. 加入1倍体积(约750μl)的自备的异丙醇到上清液中,盖紧盖子后用手上下颠倒30混匀。此时一般将有絮状DNA沉淀出现。
10. 12000~15000g室温离心3分钟。此时管底将有微小DNA沉淀,小心弃上清,注意不要丟弃DNA沉淀。
11.在离心管中加1mL 75%乙醇,短暂震荡,12000~15000g室温离心3分钟,弃上清。
12. 重复上述操作一次。
13. 短暂离心,小心吸弃残留的液体(此步不要省略,否则残留的液体含乙醇将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应),室温晾干。
14. 加入50-100μl自备的TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。直接取5-10μl电泳检测DNA,其余放冰箱备用。
人载脂蛋白C1(ApoC1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Apolipoprotein C-I, Apolipoprotein C1, APOC1, apo-CIB, apoC-IB, Human ApoC1(Apolipoprotein C1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组ApoC1浓度
人波形蛋白(VIM)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:VIM, FLJ36605 Human VIM(Vimentin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组VIM浓度
人磷酸化神经丝H(pNF-H)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Neurofilament Heavy,Neurofilament, Heavy Polypeptide 200kDa,Neurofilament Heavy Polypeptide,Neurofilament Triplet H Protein,200 KDa Neurofilament Protein,NF-H,NFH,KIAA0845,CMT2CC Human pNF-H (Phosphorylated Neurofilament H) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组pNF-H浓度
Stigmasta-5,8-dien-3-ol 570⁻⁷2-9 中文名: 分子式:C29H48O 度:% 关键词: 豆甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠胰蛋白酶(ypsin)ELISA试剂盒
Stigmasta-4,25-dien-3-one 848669-08-9 中文名: 分子式:C29H46O 度:% 关键词: 豆甾烷; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠合成酶(NOS)ELISA试剂盒
Stigmasta-4,22-diene-3β,6β-diol 167958-89-6 中文名: 分子式:C29H48O2 度:97.5% 关键词: 豆甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠合成酶elisa试剂盒 小鼠合成酶试剂盒 规格型号:96T/48T 小鼠合成酶试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠合成酶试剂盒、小鼠合成酶eisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。
Stigmasta-4,22-dien-3-one 55722-32-2 中文名:豆甾-4,22-二烯-3-酮 分子式:C29H46O 度:% 关键词: 海枣; 豆甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠胰淀素elisa试剂盒 小鼠胰淀素试剂盒 规格型号:96T/48T 小鼠胰淀素试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠胰淀素试剂盒、小鼠胰淀素eisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。
Stigmasta-4,22,25-trien-3-one 848669-09-0 中文名: 分子式:C29H44O 度:% 关键词: 豆甾烷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠抑制素elisa试剂盒 小鼠抑制素试剂盒 规格型号:96T/48T 小鼠抑制素试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠抑制素试剂盒、小鼠抑制素eisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。
植物DNA提取试剂盒Phyperunolide E 1198400-52-0 中文名: 分子式:C28H40O9 Human cardioophin 1 (CT-1) ELISA Kit 人心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒
Withanolide C 108030⁻⁷8-0 中文名:醉茄内酯C 分子式:C28H39ClO7 Humanneuronalnuclearaoaibody,ANNA-1/HuELISAKit 人抗神经元核抗体1型/抗Hu抗体(ANNA-1/Hu)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Physapruin A 155178-03-3 中文名: 分子式:C28H38O7 HumanElastaseELISA试剂盒人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒规格:96T/48T
4β-Hydroxywithanolide E 54334-04-2 中文名:4β-羟基醉茄内酯E 分子式:C28H38O8 组织PDGFRβ激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
Withaperuvin C 81644-34-0 中文名: 分子式:C28H38O7 Humanpeptidoglycan,PGELISAKit人肽聚糖(PG)ELISA试剂盒规格:96T/48T
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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