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柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR)
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/15 9:32:24
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详细内容
线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化。本试剂盒克服了上述缺点。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR) | Animal mitochondrial DNA column extraction kit(PCR Grade) | 50次 |
产品特点：
不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。
储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存好放4℃。
使用方法：
一、培养细胞预处理
用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。
用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二、组织细胞预处理
用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小好)，转移到1.5mL塑料离心管中，用于mtDNA提取。注意：好不要使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。
三、血液预处理
将3～5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
用自备PBS洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四、mtDNA提取
在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀，用须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
冰上放置6～8分钟。注意不要超过8分钟。
加入350μL冰浴的溶液C，温和混匀4～6次，可见白色沉淀物产生，然后放冰上放置20～25分钟。
室温12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。
注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
重复上步1次。
室温12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入30～50μL 65～80℃预热的DNA洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
室温12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。
由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30～50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20～30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
人脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:A-FABP, AFABP, AP2, Adipocyte Protein 2 Human FABP4(Fatty Acid Binding Protein 4, Adipocyte) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组FABP4浓度
人可溶性白介素6受体(sIL-6R)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称: Human sIL-6R(Soluble Interleukin 6 Receptor) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组sIL-6R浓度
人多配体聚糖3(SDC3)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:SDCN, SYND3 Human SDC3(Syndecan 3) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组SDC3浓度
Stavudine 3056-17-5 中文名：司他夫定 分子式：C10H12N2O4 HumanAi-SomaticMuscleAibody,ASAELISAKit 人抗骨骼肌抗体(ASA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Albendazole 54965-21-8 中文名：阿苯达唑 分子式：C12H15N3O2S Humancytokeratin20,CK-20ELISA试剂盒人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine 175291-56-2 中文名：Fmoc-苏氨酸磷酸苄酯 分子式：C26H26NO8P 组织HSV(HERPESSIMPLX)病毒定性检测试剂盒20次
8-Phenyloctanol 10472-97-6 中文名：8-苯基辛醇 分子式：C14H22O HumanPlateletFactor4,PF-4ELISAKit人血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒规格：96T/48T
8-Phenyloctanoic acid 26547-51-3 中文名：8-苯基辛酸 分子式：C14H20O2 兔子脂联素(ADP)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR)Deoxycholic acid 83-44-3 中文名：去氧胆酸 分子式：C24H40O4 Human neonatal thyroid stimulating hormone (N-TSH) ELISA Kit 人新生儿促甲状腺素(N-TSH)ELISA试剂盒
Timosaponin AIII 41059⁻⁷9-4 中文名：知母皂苷AIII 分子式：C39H64O13 Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit 人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Diosgenin 512-04-9 中文名：薯蓣皂苷元 分子式：C27H42O3 HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA试剂盒人腺来源的内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
Sarsasapogenin 126-19-2 中文名：菝葜皂苷元 分子式：C27H44O3 组织PIM2激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
Makisterone A 20,22-monoacetonide 245323-24-4 中文名： 分子式：C31H50O7 humanPepsinogenA,PG-AELISAKit人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒规格：96T/48T
热门标签：柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR)
