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改良BCA法蛋白定量试剂盒
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详细内容
| 本试剂盒是在常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知,二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子(biuret reaction),一价铜离子和独特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。 试剂盒组份(500次): 蛋白标准(5mg/mlBSA)—————0.5ml 溶液A—————————————50ml×2 溶液B—————————————2ml 产品特点: 1.步骤简单,45分钟内完成测定,比经典Lowry法快4倍而且更加方便。 2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl 。 3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80。 4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。 5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。 储存条件:-20℃,有效期1年。 本制品别名:BCA法蛋白浓度测定试剂盒|BCA法蛋白浓度检测试剂盒|改良BCA蛋白检测试剂盒 储存条件:-20℃,有效期1年。 本制品别名:BCA法蛋白浓度测定试剂盒|BCA法蛋白浓度检测试剂盒|改良BCA蛋白检测试剂盒 本试剂盒是在常用的蛋白浓度检测方法之一Bradford法基础上(考马斯亮蓝结合显色法)改进而成。当Bradford染色液(考马斯亮蓝)和蛋白在酸性条件下结合时,大吸光值波长立刻由465 nm转移至 595nm,同时颜色由褐色转为蓝色,通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值,推算出蛋白浓度。 产品特点: 1.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。 2.检测速度快,10-20个样品只需不足10分钟即可完成。 3.在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 注意事项 1. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 2. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团,每次使用请颠倒6~8 次并且竖直抓住瓶口做水平划圈动作,旋转瓶中液体,帮助充分混匀,但不可以上下振荡混匀。 3. 低温会降低Bradford 染色液的敏感度,因此每次使用应该使Bradford 染色液回复到室温。仅仅将需要的Bradford 染色液复温,可以减少复温时间。倒出每次需要的Bradford 染色液回复到室温,将原瓶放回冰箱。 4. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。 5. 由于Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出大致精确的蛋白浓度。 6. 需要酶标仪一台,佳检测波长为595nm,也可以在570-610nm 之间波长测定,但会降低一些敏感度;并需96 孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但是测定蛋白浓度时,需根据测定吸光度的杯子的体积,按比例调整Bradford 染色液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。 7. Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.125%,Triton X-100 低于0.125%,Tween 20 低于0.06%。可以考虑用纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于纯水等方法来消除干扰物质的影响。 储存条件:-20℃,有效期9个月。 本制品别名:改进型Bradford法蛋白定量试剂盒|Bradford蛋白浓度测定试剂盒 |
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 改良BCA法蛋白定量试剂盒 | Protein Quantitation Kit By BCA | 200次|500次|2500次|5000次 | GOY-F11223 |
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品特点:
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
组织血红素氧合酶-1(HEME OXYGENASE-1)活性荧光定量检测试剂盒20次茜素-β-半乳糖苷琼脂
改良BCA法蛋白定量试剂盒C7H12N2O4=188.18
热门标签:改良BCA法蛋白定量试剂盒













