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蛋白快速染色液
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详细内容
中文名称:蛋白快速染色液
英文名称:FastStain Protein Staining Reagent
产品规格:500ml
产品货号:GOY-F11200
| 本产品采用独特的配方,可对电泳后凝胶上的蛋白质条带进行染色,而对凝胶本底几乎没有着色。染色过程仅需15分钟,染色后几乎不需要脱色。本产品灵敏度高,可检测到15ng BSA蛋白;若实验对检测灵敏度有较高要求,可将凝胶放置在染色液中2小时,可达到大灵敏度(BSA:5ng)。 注意事项: 1、操作时请务必佩戴手套,如溅到皮肤上,请立即用大量水冲洗。 2、染色的凝胶洗涤非常重要,否则会造成凝胶染色背景加深。 3、如染色后有轻微背景,可将染色后的凝胶用过量蒸馏水室温洗涤、脱色。 4、本产品适用于变性和非变性凝胶电泳后的蛋白染色。 操作步骤: I 常规操作步骤: 1、常规PAGE电泳完成后,小心取下凝胶,根据凝胶的大小,将其放置在一个可微波加热的容器中。 2、加入足量的纯水,使凝胶可以在其中自由晃动,微波加热至沸腾。室温晃动2 min,彻底弃去水。 3、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到纯水洗涤后的凝胶的盒中,使其足以没过凝胶,轻轻晃动。并在微波炉中高火加热至沸腾,取出后室温轻轻摇动,5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色,15 min后显色基本完成。 注意:此操作检测的灵敏度为:用BSA检测,灵敏度为15ng。若实验对检测灵敏度有较高要求,可将凝胶放置在染色液中2小时,可达到大灵敏度(用BSA检测,灵敏度为5ng)。 II 快速助染步骤: 1、常规PAGE电泳完成后,小心取下凝胶,根据凝胶的大小,将其放置在一个可微波加热的容器中。 2、加入足量的纯水,使凝胶可以在其中自由晃动,微波加热至沸腾。室温晃动2 min,弃去水。 3、重复步骤2两次。 4、取20-25ml(以液面刚好覆盖凝胶为宜)凝胶染液加入到含纯水洗涤后的凝胶的盒中,使其足以没过凝胶,轻轻晃动后,微波高火加热至沸腾,取出后置于室温并轻轻晃动,5-10 min后凝胶中的蛋白条带开始显色,15 min后显色完成。 注意:此操作检测的灵敏度为:用BSA检测,灵敏度为5ng。 储存条件:室温 |
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
4%多聚醛固着液50毫升派洛宁Y
蛋白快速染色液CAS号:63699⁻⁷8-5
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