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上海谷研实业有限公司 主营产品:lisa试剂盒/菌种/ATCC细胞/生化试剂/标准品

第10年

当前位置: 阿仪网 > 上海谷研实业有限公司 > 产品展示 > 分子试剂 > 克隆与表达 > pET-N-GST-PreScission质粒

pET-N-GST-PreScission质粒

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title型号: 原产地:中国大陆 更新时间:2026/11/5 9:41:34

产品摘要:pET-N-GST-PreScission质粒正在出售的产品:磺嘧啶钠(标准品)异荭草素藻类E高效液相色谱法定量检测试剂盒
1-氨基-2-甲基吡啶化物异茴芹内酯油类E高效液相色谱法定量检测试剂盒
4-氨丁缩二乙异莲心碱总氨基酸含量比色法定量检测试剂盒
4

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产品完善度: 访问次数:588

试剂盒

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菌种

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生化检测试剂盒

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分子试剂

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旗舰版网址:http://www.elisaguyan.com

详细内容

实验要点:
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:pET-N-GST-PreScission质粒
英文名称:pET-N-GST-PreScission Plasmid
产品规格:1μg|100μg
产品货号:GOY-F11025
pET-N-GST-PreScission是一种用于表达N端含有GST-tag的目的蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有PreScission酶切位点,可通过PreScission Protease切除N端的GST标签。本质粒为卡那抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。
本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP,对应的核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST标签。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。
通常可以采用如GoldBalb GST-tag Purification Resin和GST标签蛋白纯化试剂盒等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体检测和少量地分离纯化目的蛋白。
使用说明:
1.使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pET-N-GST-PreScission质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
载玻片细胞RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA试剂盒,
冰冻切片组织RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人Agouti相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒,
石蜡切片组织RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人着丝粒蛋白B(CENP-B)ELISA试剂盒,
细胞RHO 蛋白表达比色法定量检测试剂盒10/50 次小鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒,
细胞RHO 蛋白表达荧光定量检测试剂盒10/50 次大鼠c-Jun氨末端激酶(JNK)ELISA试剂盒,
RHO 蛋白表达西方杂交分析试剂盒5次大鼠糖原化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA试剂盒,
RHO 蛋白免疫共沉淀分析试剂盒5次大鼠质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA试剂盒,
RHO 蛋白表达ELISA定量检测试剂盒25次山羊生长激素释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒,
细胞TRAIL 蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次兔子胰岛素(INS)ELISA试剂盒,
载玻片细胞TRAIL 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次亚硫盐-多粘菌素-磺嘧啶琼脂础 用于产气荚膜梭菌的平板计数(GB标准)
细胞CREB蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次缓冲李氏菌增菌肉汤础用于李氏菌的增菌培养(MercK标准)
载玻片细胞CREB蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次朝藿定B Epimedin B
冰冻切片组织CREB蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒,BNP ELISA kit
石蜡切片组织CREB蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人膀胱癌抗原(UBC)ELISA试剂盒,UBC ELISA kit
载玻片细胞CREB蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人脱氧胶原吡啶交联(DPD)ELISA试剂盒,DPD ELISA
CLEC5A/MDL1 C型凝集素结构域家族5成员A抗体庚酯 ≥99%, FCC, FG
LAMP-3/DC-LAMP/CD208 CD208抗体庚酯 AR,98.5%
DC-SIGN/CD209 间粘附分子非整合素蛋白3抗体辛酯 Standard for GC,>99%(GC)
DC-SIGNR/CD299 CD299抗体辛酯 99%
DEC-205/CD205/Ly75 LY75抗体辛酯 ≥99%, FCC, FG
DCP 异常凝血酶原/脱-γ-羧凝血酶原抗体丁酯 GCS,≥99.5% (GC)
Doublecortin 双皮质素抗体丁酯 99%
Phospho-Doublecortin (Ser297) 化双皮质素抗体丁酯 ≥99%, FCC
pET-N-GST-PreScission质粒干燥失重:≤0.30%
灼烧残渣:≤0.10%
氯化物:≤0.02%
硫酸盐:≤0.02%
铵盐:≤0.002%
重金属:≤0.001%
砷盐:≤0.0001%
性状(以下信息仅供参考):白色结晶性粉末,无气味,微有甜味。有吸湿性。与水合茚三酮反应呈黄色,被冰乙酸酸化后则显红色。易溶于水和乙醇,不溶于。熔点220-222℃(分解)

热门标签:pET-N-GST-PreScission质粒

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