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LP8000转染试剂
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详细内容
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| LP8000转染试剂 | LP8000 Transfection Reagent | 0.5mL|1.5mL|5×1.5mL | GOY-F11014 |
产品说明书:
| 本制品是一种以纳米材料为基础的便捷的高效细胞转染试剂,达到甚至过了国际主流转染试剂的转染效果,并且转染过程无须任何孵育时间,实现了细胞转染的至简操作。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中,也可以用于活体动物的核酸转染以及用于基因治疗。 LP8000转染试剂的纳米技术可保证其瞬时转染和稳定转染时的可靠性和稳定性。 LP8000转染试剂使用特别便捷,无血清培养液和核酸及转染试剂可以直接混匀,质粒转染无需任何孵育时间,即可直接加入到细胞培养器皿内,实现了细胞转染的至简操作。 LP8000转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、通常观察不到细胞毒性,对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用,特别适用于难转染的贴壁细胞。LP8000转染试剂由于几乎完全没有细胞毒性,从而在转染后无需进行细胞培养液的更换,在转染24-48小时后直接收集细胞进行蛋白表达鉴定即可。 LP8000转染试剂经过对小鼠胚胎成纤维细胞NIH3T3、人胚胎肾细胞HEK293/HEK293T、宫颈癌细胞Hela、结肠癌细胞HCT116、肝细胞HepG2和肺癌细胞A549等多种细胞的测试,转染效率和Thermo公司的Lipofectamine 3000 Transfection Reagent、Promega公司的ViaFect Transfection Reagent相当,在一些细胞中甚至比Lipofectamine 3000和ViaFect的转染效率更高。 LP8000转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染,也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。 LP8000转染试剂转染过表达质粒后,通常24-48小时后达到较高的蛋白表达水平,并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时;转染siRNA通常3-5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。 LP8000转染试剂转染细胞时,不受培养液中的血清和抗生素的影响,即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。 LP8000转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。 |
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
细胞BAX蛋白表达荧光定量检测试剂盒10/50 次豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒,
LP8000转染试剂灼烧残渣:≤0.10%
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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