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LP293S转染试剂
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详细内容
中文名称:LP293S转染试剂
英文名称:LP293S Transfection Reagent
产品规格:1mL|10mL|100mL
产品货号:GOY-F11009
| 本制品是一种非常高效的基于阳离子脂质体的新型转染试剂,门适用于悬浮培养的HEK293细胞,如Freestyle 293-F等,进行质粒转染和重组蛋白大量表达。本产品与Thermo公司的293fectin Transfection Reagent和Merck公司的293-Free Transfection Reagent的用途和使用效果基本一致,与Thermo公司的Freestyle MAX Reagent相比,用于悬浮培养的293细胞时效果基本一致。 LP293S转染试剂对Freestyle 293-F细胞的转染效率非常高(约85%),同时细胞毒性低、重复性好、操作简单、转染后无需更换培养液。 LP293S转染试剂也同样适用于293系列贴壁细胞的转染,但转染293系列贴壁细胞时,推荐使用性价比更高的LP293。 LP293S转染试剂转染时血清的存在不会影响转染效率,这样可以减少避免很多阳离子脂质体因为需要在转染时去除血清而对细胞造成的损伤。 LP293S转染试剂毒性低,转染后无需更换培养液,一方面细胞的良好生长状态保证了目的蛋白的大量表达,另一方面又减少了操作步骤并节省了培养液。 LP293S转染试剂转染Freestyle 293-F细胞目的蛋白表达质粒后,通常在48⁻⁷2小时后达到比较理想的蛋白表达水平。 LP293S转染试剂的转染效率可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。 保存条件: 4℃保存。长期不使用可以-20℃保存。-20℃保存后会有沉淀产生,须37℃水浴30min,使完全溶解后才能用于细胞转染。 注意事项: 使用高纯度的DNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒,可以使用我公司的质粒大量抽提试剂盒(YT003)进行抽提,以保证可以获得较高的转染效率。 -20℃等低温保存后本产品会结冻,溶解时会出现沉淀,此时37℃水浴30min,使完全溶解就可以用于细胞转染,并且不会影响使用效果。收到的本产品可能会因为干冰等低温运输导致溶解后出现沉淀,37℃水浴30min,使完全溶解就可以正常使用了。 转染细胞必须处于良好的生长状态。 需自备不含抗生素的无血清Freestyle 293-F细胞培养液,可以使用SMM 293-T1培养基(M293TI-1)。 LP293S转染试剂不能vortex或离心,可以用移液器轻轻吹打混匀或缓慢摇动混匀。 LP293S转染试剂使用后请立即盖好盖子,避免长时间暴露在空气中,影响转染效率。 本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。 本产品仅限于业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。 |
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
冰冻切片组织AKT蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人β乳球蛋白(β-Lg)ELISA试剂盒,
LP293S转染试剂D-甲硫氨酸
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