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上海谷研实业有限公司 主营产品:lisa试剂盒/菌种/ATCC细胞/生化试剂/标准品

第10年

当前位置: 阿仪网 > 上海谷研实业有限公司 > 产品展示 > 分子试剂 > 克隆与表达 > Y187酵母感受态细胞

Y187酵母感受态细胞

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title型号: 原产地:中国大陆 更新时间:2026/11/5 9:41:34

产品摘要:Y187酵母感受态细胞正在出售的产品:甘10-脱乙酰巴卡丁III水中肠球菌(Enterococci)基因定性检测试剂盒
甘(Sigma)10-硝基喜树碱水中肠球菌(Enterococci)基因荧光定量检测试剂盒
L-甘(标准品)11-氧-罗汉果皂甙V水中

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产品完善度: 访问次数:606

试剂盒

ATCC细胞

标准品

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菌种

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elisa试剂盒

PCR检测试剂盒

生化检测试剂盒

原代细胞

质粒

荧光PCR试剂盒

细胞生物学试剂

分子试剂

细胞系

细胞培养基

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详细内容

实验要点:
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:Y187酵母感受态细胞
英文名称:Y187 Chemically Competent Cell
产品规格:10×100μl|50×100μl
产品货号:GOY-F10979
Y187菌株是GAL4系统酵母单杂,双杂实验用菌株,MATα型,可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold,AH109等)通过mating操作进行筛库试验。
Transformation marker为:trp1,leu2,报告基因为:lacZ,MEL1。
Y187-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用:PGBKT7和PGADT7。
质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1,用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白;
质粒PGADT7的筛选标志为LEU,用于表达AD(GAL4 C端768 ~881位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。
GAL4系统原理:一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域:位于N端1 ~174位氨基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。
DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS,并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。
BD和AD单独存在不能激活转录,但当二者接近时,则呈现完整的GAL4活性,使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下,BD不与AD结合,将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合,形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD),如果bait和prey发生相互作用,就会促使BD和AD的相互接近,形成完整的GAL4,从而激活报告基因的转录。
Y187有两个报告基因:lacZ,MEL1,分别由两种不同的启动子(G1,M1)启动,这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同,其余部分均不同,大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。Y187感受态细胞经特殊工艺制作,-80℃可保存三个月,经PGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
保存条件:-80
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
肝素(heperin)纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒50次大鼠凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒,
肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒20次大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒,
肝素(heperin)活性比色法定量检测试剂盒20次大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒,
水蛭素(hirudin)纤维蛋白检测法(Fibrometer)分析试剂盒50次大鼠凋亡相关因子配体(FASL) ELISA试剂盒,
水蛭素(hirudin)活性比色法定量检测试剂盒20次大鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒,
水蛭素(hirudin)活性荧光定量检测试剂盒20次猪肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒,
白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)检测试剂盒20次鸡免疫核糖核(Irna)ELISA试剂盒,
凝血酶原时间(PT)检测试剂盒20次兔子组织因子(TF)ELISA试剂盒,
优球蛋白溶解时间(ELT)检测试剂盒20次兔子质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒,
活化部分凝血活酶时间(APTT)检测试剂盒20次扁豆凝集素(LCA)ELISA试剂盒,
酰胺水解活力(AMINOLYTIC)检测试剂盒20次丙二醛(MDA)ELISA试剂盒--动物,人
纤维素分解活力(FIBRINOLYTIC)检测试剂盒20次Ⅰ型胶原羧端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒--动物,人
血栓溶解活力(THROMBOLYTIC)体外检测试剂盒20次双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒--动物,人
D-二聚体检测试剂盒10次环鸟苷(cGMP)ELISA酶联免疫吸附试剂盒--卖
细胞组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)活性比色法定量检测试剂盒20次水平板计数琼脂培养
Integrin beta 2/CD18/LFA-1 整合素β2抗体罗丹明B 高纯,≥95.0%(HPLC)
Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759) 化整合素β2抗体树脂天青 90%
CD184/CXC-R4 表面趋化因子受体4抗体罗丹明6G AR
CD19 CD19抗体树脂天青 for cell culture,≥90% (HPLC)
Phospho-CD19 (Tyr531) 化CD19抗体芘 99%
CD20 CD20抗体迷迭香 分析标准品,≥97%
CD22/BLCAM B淋巴粘附分子CD22抗体蓖麻油 分析标准品,99%
CD23/Fc EpsilonR II CD23抗体D-核糖-5-二钠盐 95%
Y187酵母感受态细胞C5H10N2O3=146.15
别:BR
含量:≥99.0%
比旋光度:+6.3~+7.3º
PH:4.0~6.0
干燥失重:≤0.30%
砷盐:≤1ppm
灼烧残渣:≤0.30%

热门标签:Y187酵母感受态细胞

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