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血清miRNA提取试剂盒
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详细内容
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:血清miRNA提取试剂盒
英文名称:Serum microRNA Extraction Kit
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9590
| 本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶,烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜, 再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除, 后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。 近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15~30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA,对于血清、血浆样本更是由于其自身特点更难提取。本试剂盒的出现很好的解决了这一问题 产品组分: Lysis buffer————避光50 ml Wash Solution 1————12 ml(第yi次使用加入28ml 无水乙醇) Wash Solution 2/3————10 ml(第yi次使用加入42ml 无水乙醇) RNase-free H2O————10 ml 吸附柱和收集管————50 套 产品特点: 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。 3.特殊的裂解液配方,可以处理更多的血清/血浆样品。 4.多次柱漂洗确保高纯度,可用于RNAi,RT-PCR,Northern-blot和各种实验。 注意事项 1. 第yi次使用请先在Wash Solution 1 瓶和Wash Solution 2/3 瓶中加入量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 2. 除说明外,所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm 的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 3. 需要自备乙醇,。 4. Lysis buffer 和Wash Solution 1 含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 5. RNA 纯度及浓度检测: 一般情况下通过测量OD260 值可以知道RNA 产量,测量OD260/OD280 比值可以是衡量蛋白质污染程度的指标之一,但是由于血清/血浆的RNA 含量特别低,已经低于分光光度计测量的下限,无法测量准确,因此一般无法通过测量OD 值或者比值的方法来判断纯度或者浓度,只能通过下游做荧光定量RT-PCR 来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的RNA 主要是小于100 nt 的小RNA,因此传统的电泳检测RNA 完整性并不适用于血清/血浆RNA。 储存条件:室温,有效期6个月。(lysis buffer需4℃避光保存) 本制品别名:血清miRNA分离试剂盒|血清miRNA纯化试剂盒|血清microRNA分离试剂盒|血清microRNA纯化试剂盒|血清microRNA提取试剂盒|血清总RNA提取试剂盒 |
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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血清miRNA提取试剂盒4-Aminosalicylic acid
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